بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة من نوع Qiagen، Y9030L، E. coli (1.5 ملغ)

1.5 ملغ من بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة من الإشريكية القولونية (0.5 مل بتركيز 2.75 ملغ/مل)

سمات

- يرتبط بالحمض النووي أحادي السلسلة
- يُرخي بنية الحمض النووي الثانوية ويعزز استمرارية التفاعلات التي تتوسطها بوليميرازات الحمض النووي

تفاصيل المنتج

يرتبط بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة في بكتيريا الإشريكية القولونية بشكل تفضيلي بالحمض النووي أحادي السلسلة، مُشكِّلاً رباعيًا من أربع وحدات فرعية متطابقة بوزن 18.9 كيلو دالتون، مما يحمي 8-16 نيوكليوتيدًا. لا يرتبط هذا البروتين جيدًا بالحمض النووي ثنائي السلسلة. في الطبيعة، يشارك البروتين في تضاعف الحمض النووي وإعادة تركيبه وإصلاحه. في المختبر، وُجد أن بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة في بكتيريا الإشريكية القولونية يُحفِّز تفاعلات مُحدَّدة بوساطة بوليميراز الحمض النووي عن طريق إرخاء البنية الثانوية للحمض النووي وتعزيز قدرة الإنزيم على معالجة الحمض النووي.

يتم توفير هذا الإنزيم في 50 ملي مولار من Tris-HCl، و200 ملي مولار من NaCl، و1.0 ملي مولار من DTT، و0.1 ملي مولار من EDTA، و50% من الجلسرين؛ درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية.

أداء

الاختبار: الوحدات المختبرة
النقاء: غير متوفر
إكسونوكلياز أحادي السلسلة: 25 ميكروغرام
إنزيم إكسونوكلياز مزدوج السلسلة: 25 ميكروغرام
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 25 ميكروغرام
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: غير متوفر

- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
- الوزن الجزيئي: 18975 دالتون

مبدأ

يتم إنتاج البروتين الإنزيمي المؤتلف بواسطة سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تحمل جين الإشريكية القولونية لبروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة.

إجراء

- Meyer, RR and Laine, PS (1990) Microb. Rev., p342-380.
- Krauss, G. et al. (1981) Biochemistry., 20, 5346-52.
- وينر، جيه إتش وآخرون (1975) مجلة الكيمياء البيولوجية، 250، 1972-80.
- تشو، كيو. (1992) Nuc. Acids. Res.، 20(16)، 4371.
- رابلي، ر. (1994) مول. بيوتكنولوجي، 2، 295-298.

تعليمات الاستخدام

إن بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة (SSB) في بكتيريا الإشريكية القولونية هو بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة (SSB) الذي يمكن استخدامه لتثبيت مناطق الحمض النووي أحادي السلسلة وتعزيز دقة بوليميراز الحمض النووي وقدرته على المعالجة في تفاعل البوليميراز المتسلسل (1،5).

يمكن أيضًا استخدام البروتين لتقليل القطع الأثرية الناتجة عن الطفرات الحذفية أثناء تفاعل البوليميراز المتسلسل بوساطة بوليميراز الحمض النووي Taq (4)، وتحسين إنتاجية تضخيم الحمض النووي، وتمكين تسلسل قوالب الحمض النووي الإشكالية، على سبيل المثال، المناطق ذات الهياكل الثانوية القوية (5).

كنقطة بداية في تفاعلات PCR التي تتوسطها SSB، أضف بروتين E. coli SSB بتركيز يتراوح بين 20-320 نانوغرام/ميكرولتر لكل 50 ميكرولتر من التفاعل لتحديد التركيز الأمثل.

مراجع:

ضبط الجودة

يتم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويُقاس النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة الحزمة المقابلة للبروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA أحادية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA ثنائية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

تم تأكيد قدرة البروتين على الارتباط بالحمض النووي أحادي السلسلة في اختبار تثبيط تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بإضافة كميات متناقصة من بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة (SDNA) من الإشريكية القولونية إلى سلسلة من تفاعلات PCR تحتوي على الحمض النووي المستهدف، و200 ميكرومول من النيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs)، ومحلول منظم PCR بتركيز 1X، وإنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq. حُضنت التفاعلات في جهاز تدوير حراري وخضعت لـ 25 دورة من تفاعل PCR. فُصلت العينات باستخدام الرحلان الكهربائي على هلام الأغاروز، وسُجلت الكمية اللازمة لمنع تراكم ناتج PCR بنسبة 100%. معايير قبول الاختبار: يلزم 0.70 ميكروغرام من بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة (SDNA) من الإشريكية القولونية لتثبيط تضخيم 5 نانوغرام من الحمض النووي المستهدف بعد 25 دورة من تفاعل PCR.

التطبيقات

- تحسين دقة بوليميراز الحمض النووي
- عزل البادئ
- يسمح بقراءة أطول في التسلسل الناري لتحليل تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل: