كياجين، Y9260L، ريكا (1.5 ملغ)

1.5 ملغ (عبوة تقييم) RecA (0.75 مل بتركيز 2.0 ملغ/مل) ومحلول تفاعل RecA 10X (1.5 مل)

سمات

- يعزز تبادل السلاسل بين الحمض النووي أحادي السلسلة والحمض النووي المزدوج المتماثل
- يمكن لمركب RecA–ATP أحادي السلسلة من الحمض النووي أن يعمل كبروتين مساعد
- يمكن استخدام المركبات مع قليل النوكليوتيدات المحددة الموقع لاستهداف وقطع أجزاء كبيرة من الحمض النووي بشكل خاص

تفاصيل المنتج

يرتبط بروتين RecA، الذي يؤدي دورًا في إعادة تركيب الحمض النووي وإصلاحه (1، 2، 3)، بالحمض النووي أحادي السلسلة، مما يؤدي إلى بلمرة RecA لتكوين معقد نووي بروتيني. يصطف هذا المعقد مع الحمض النووي ثنائي السلسلة المكمل، مما يحفز RecA على تبادل سلاسل الحمض النووي. يُحفز ارتباط RecA بالحمض النووي عن طريق تحلل ATP أو نظائره غير القابلة للتحلل. كما يعمل معقد RecA-ATP-الحمض النووي أحادي السلسلة كعامل مساعد في التحلل البروتيني لبروتينات LexA وUmuD وبعض بروتينات العاثيات. وقد استُخدم معقد RecA مع قليل النوكليوتيدات الموجهة لاستهداف وقطع أجزاء كبيرة من الحمض النووي بشكل انتقائي (4).

يتم توفيره في: 10 ملي مولار Tris-Cl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA و 50% جلسرين؛ درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية.

المرفقات: 10X RecA Reaction Buffer (B9260): 700 مليمولار Tris·Cl، 100 مليمولار MgCl2 و 50 مليمولار DTT؛ درجة الحموضة 7.6 عند 25 درجة مئوية.

أداء

الاختبار: الكمية المختبرة
النقاء: غير متوفر
إكسونوكلياز أحادي السلسلة: 2 ميكروغرام
إكسونوكلياز مزدوج السلسلة: 2 ميكروغرام
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 2 ميكروغرام
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 5 ميكروغرام

- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
- الوزن الجزيئي: 37973 دالتون

خصائص الإنزيم

مبدأ

مصدر بروتين الإنزيم المؤتلف: يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية التي تفرط في التعبير عن جين recA الخاص ببكتيريا الإشريكية القولونية من البلازميد.

تعريف الوحدة: يباع حسب كتلة البروتين النقي المحدد عند OD 280 (A 280 = 0.516 عند 1 ملغم/م، 1 سم).

إجراء

تحليل مراقبة الجودة

يتم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة الحزمة المقابلة للبروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA أحادية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA ثنائية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم، ويتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.

يتم تقييم التلوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع 16S rRNA.

التطبيقات

- الطفرات
- التقاط الحمض النووي التكميلي (cDNA) باستخدام تقنية التقارب

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل:

المراجع: 1. كوكس، م.م. (2007) مراجعات نقدية في الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية 42:41. 2. بيل، س.إ. (2005) علم الأحياء الدقيقة الجزيئية 58:358. 3. شينغ، إكس.، بيل، س.إ. (2004) مجلة البيولوجيا الجزيئية 342:1471. 4. فيريني، ل.ج.، كاميريني-أوتيرو، ر.د. (1991) العلوم 254:1494.