Product Description
لـ 24 تفاعلًا: 5x مزيج تجزئة WGS (1 × 0.24 مل)، 10X محلول تجزئة (1 × 0.25 مل) ومعزز (1 × 0.25 مل)
سمات
- إنتاجية عالية للمكتبة وحساسية عالية
- نطاق قابل للتعديل لأحجام الأجزاء
- متوافق مع كمية الحمض النووي المدخلة من 1 نانوغرام إلى 1 ميكروغرام
- مكتبات قابلة للتكرار
- انخفاض معدلات التكرار وتحيز توزيع القواعد
- التجانس عبر نطاق واسع من محتوى GC
تفاصيل المنتج
يوفر مزيج تجزئة تسلسل الجينوم الكامل حلاً أحادي الأنبوب لبناء المكتبات لمنصات Illumina. يدعم هذا البروتوكول التجزئة، وإصلاح النهايات، وإضافة ذيل dA في خطوة تفاعل واحدة، مما يبسط سير العمل بشكل كبير ويقلل من إجمالي وقت التفاعل والوقت اللازم للتنفيذ اليدوي.
يتم تزويد مزيج تجزئة WGS بمخزن تجزئة 10X (رقم الكتالوج B0330) ومحسن (رقم الكتالوج B0340).
أداء
- سير عمل أسرع مع مكتبات عالية الجودة وقابلة للتكرار
- إنتاجية مكتبة أعلى وحساسية أفضل عند مدخلات 100 نانوغرام و100 بيكوغرام
- أحجام شظايا قابلة للتخصيص وتجزئة قابلة للتكرار بدرجة عالية
- انخفاض تحيز توزيع القاعدة عند نقطة البداية
- معدل تكرار أقل بكثير عند استخدام كميات قليلة من الحمض النووي
- الأداء من أي مدخلات
- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
تغطية الجينوم لمزيج تجزئة تسلسل الجينوم الكامل (WGS) مماثلة للقص الميكانيكي باستخدام كل من 100 نانوغرام و1 نانوغرام من الحمض النووي
يوفر مزيج تجزئة WGS ما يلي:
خصائص الإنزيم:
مبدأ
- استخدم ممارسات المختبر الجيدة لتقليل التلوث المتبادل لمنتجات الأحماض النووية.
- استخدم دائمًا أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وأنابيب الطرد المركزي الدقيقة وأطراف الماصات المعتمدة بأنها معقمة وخالية من إنزيمات DNase و RNase.
- قبل البدء، امسح منطقة العمل والماصات بمنتج تنظيف RNase وDNA، مثل RNase Away (Molecular BioProducts, Inc. San Diego, CA).
- لضمان تضخيم المكتبة بشكل متسق، تأكد من أن جهاز التدوير الحراري المستخدم في هذا البروتوكول يعمل بشكل جيد وتمت معايرته وفقًا لمواصفات الشركة المصنعة.
- اقرأ البروتوكول بالكامل قبل البدء. انتبه إلى نقاط التوقف التي يمكن عندها تجميد العينات عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، وخطط سير عملك وفقًا لذلك.
تتأثر عملية تفتيت الحمض النووي باستخدام الإنزيمات بعوامل عديدة، مثل درجة حرارة التفاعل، والمدة الزمنية، وظروف الإعداد، بالإضافة إلى نوع الحمض النووي المُدخل. لذا، نوصي بشدة المستخدمين بتجربة البروتوكول وتحسين معلمات زمن التفاعل باستخدام عينات الحمض النووي نفسها أو عينات مشابهة.
الاحتياطات العامة
قبل أن تبدأ
قم بإذابة الكواشف على الجليد. بمجرد ذوبان الكواشف، امزج مزيج إنزيم التجزئة 5X عن طريق النقر بالأصابع (لا تقم بالتقليب الدوامي للمزج)، وامزج المكونات الأخرى عن طريق التقليب الدوامي السريع لتجنب أي تركيزات موضعية.
إجراء
الخطوة: درجة حرارة الحضانة (°م)
1: 4
2: 32
3: 65
4: 4
حجم ذروة القطعة من الحمض النووي المدخل، نانوغرام
250 زوج قاعدي: 350 زوج قاعدي
10:24
100: 16
1000: 14
بالنسبة إلى> 10 نانوغرام من الحمض النووي المُدخل: بالنسبة إلى الحمض النووي المُدخل من 1 إلى 10 نانوغرام
مخزن التجزئة 10X: 5
الحمض النووي المنقى: X
المُحسِّن: 0
ماء خالٍ من النيوكلياز: (35–X)
الحجم الإجمالي: 40
قبل البدء في التفاعل، من الضروري تحديد كمية الحمض النووي المدخل بالإضافة إلى المحلول المنظم الذي يوجد فيه الحمض النووي. نوصي بشدة المستخدمين بممارسة هذا البروتوكول وتحسين وقت التفاعل باستخدام نفس عينات الحمض النووي أو عينات مشابهة.
- قم بإعداد البرنامج التالي في جهاز التدوير الحراري (الجدول أدناه). تأكد من استخدام الغطاء المُسخّن للجهاز، وإذا أمكن، اضبط درجة حرارة الغطاء المُسخّن على 70 درجة مئوية. عندما تصل درجة حرارة كتلة جهاز التدوير الحراري إلى 4 درجات مئوية، أوقف البرنامج مؤقتًا.
* ملاحظة: قد يلزم ضبط وقت التفاعل بدقة أكبر تبعًا لكمية الحمض النووي المُدخلة. يُقدّم الجدول أعلاه دليلًا عامًا للمساعدة في تحديد نقطة البداية لضبط وقت التفاعل لتحقيق حجم القطعة المطلوب. للضبط الأولي، نوصي بإضافة نقطتي ضبط إضافيتين، إحداهما أطول بثلاث دقائق والأخرى أقصر بثلاث دقائق. قد يلزم إجراء تعديلات دقيقة إذا كان حجم القطعة الدقيق بالغ الأهمية.
بالنسبة لـ DNA المدخل ≤10 نانوجرام: لإنتاج مراكز حجم القطع حوالي 350 زوج قاعدي، نوصي بإضافة 2.5 ميكرولتر من المحسن إلى تفاعل 50 ميكرولتر وحضانته لمدة 10 دقائق.
٣. من المهم اتباع الإجراء الموضح أدناه للحصول على أفضل النتائج. حجم التفاعل النهائي ٥٠ ميكرولتر: استخدم الجدول أدناه لإعداد التفاعل. حضّر مزيجًا رئيسيًا على الجليد بمزج محلول التجزئة، والحمض النووي، والماء الخالي من النيوكلياز كما هو موضح في الجدول (الأحجام مخصصة لعينة حمض نووي واحدة). امزج جيدًا باستخدام الماصة برفق (لا تستخدم جهاز الخلط الدوامي). يمكن تعديل حجم المزيج حسب الحاجة لعدد العينات المطلوب (أضف ١٠٪ حجمًا إضافيًا لتعويض الفقد في الماصة عند تحضير المزيج الرئيسي لعينات متعددة).
٤. انقل ١٠ ميكرولتر من مزيج تجزئة تسلسل الجينوم الكامل ٥X إلى أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) جديد ذي جدار رقيق لكل تفاعل. أضف ٤٠ ميكرولتر من المزيج الرئيسي من الخطوة ٣، واخلط جيدًا عن طريق سحب المزيج وإعادته بالماصة ١٠-١٢ مرة. من الضروري إبقاء أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على الثلج طوال فترة تحضير التفاعل.
5. قم بتدوير أنبوب العينة بشكل متقطع وانقله فوراً إلى جهاز التدوير الحراري المبرد مسبقاً (4 درجات مئوية). استأنف برنامج التدوير.
6. عند اكتمال برنامج جهاز التدوير الحراري وعودة كتلة العينة إلى 4 درجات مئوية، قم بإخراج العينات من الكتلة وضعها على الجليد.
7. انتقل مباشرة إلى خطوة الربط. لتحقيق كفاءة ربط مثالية، نوصي باستخدام WGS Ligase (رقم المنتج L6030-WL) وإذا لزم الأمر استخدم HiFi PCR Master Mix (رقم المنتج P7670).
تحليل مراقبة الجودة
يتم تقييم وظائف مزيج تجزئة WGS 5X من خلال إجراء بناء المكتبة، و PCR/qPCR والتسلسل.
تم اختبار مكونات الإنزيم قبل تجميعها، وثبت خلوها من أي نوكليازات داخلية أو خارجية ملوثة. بلغت نقاوة الإنزيم أكثر من 95% وفقًا لتحليل SDS-PAGE، وتم تأكيد التلوث الضئيل بالحمض النووي الجينومي لبكتيريا الإشريكية القولونية بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR).
يتم اختبار دفعات محددة من مزيج الإنزيم (رقم المنتج Y9410) ومحلول التجزئة 10X (رقم المنتج B0330) وطرحها معًا. لا يُضمن الأداء في حال شراء الإنزيم والمحلول بشكل منفصل.
التطبيقات
- مكتبة NGS الإعدادية لإلومينا
هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924