Revvity، 61HI2DLF، HTRF مضاد 6His أحادي النسيلة مقترن بـ d2، 1000 نقطة اختبار

ملخص
MAb Anti-6HIS-d2 هو IgG2a تم إنتاجه ضد بروتين اندماجي موسوم بالبولي هيستيدين وموسوم بـ d2. وهو يتعرف على البولي هيستيدين الاصطناعي أو البروتين الاندماجي الموسوم بالبولي هيستيدين.
يمكن استخدام هذا الكاشف في كل من الأشكال البيوكيميائية والخلوية لدراسة مجموعة واسعة من التفاعلات: بروتين/بروتين، بروتين/ببتيد، بروتين/حمض نووي، بروتين/حمض نووي ريبوزي، بروتين/كربوهيدرات، بروتين/جزيء صغير، مستقبل/رابط.
يمكن لتقنية HTRF الكشف عن نطاق واسع من ثوابت التقارب التي تتراوح من البيكومولار إلى المليمولار المنخفض.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:

تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ الفحص
في اختبار تفاعل HTRF، يُوسَم أحد الشريكين (مباشرةً أو غير مباشرةً) بالمانح، والآخر بالمستقبل (أيضًا، مباشرةً أو غير مباشرةً). تتناسب شدة الإشارة طرديًا مع ارتباط الشريكين. في المثال الموضح هنا: يرتبط الجسم المضاد أحادي النسيلة Anti 6HIS-d2 بالشريك A الموسوم بـ 6 His، بينما يرتبط الشريك B* بجسم مضاد محدد موسوم بمانح HTRF. *يمكن أيضًا وسم الشريك B بالبيوتين، أو إضافة وسم إليه، أو دمج Fc معه. في هذه الحالات، يُستخدم كاشف HTRF المناسب (مضاد الوسم، مضاد النوع، بروتين A، ستربتأفيدين) الموسوم بالمانح للكشف.

بروتوكول الفحص
يوضح المثال على اليمين البروتوكول باستخدام حجم اختبار نهائي قدره 20 ميكرولتر للكشف عن تفاعل بين شريك A موسوم بـ 6 His وشريك B غير موسوم*. وزّع الشريكين (10 ميكرولتر)، ثم حضّن المزيج، وأضف الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد لـ 6HIS-d2 (5 ميكرولتر) والجسم المضاد للشريك B الموسوم بالمانح (5 ميكرولتر)، ثم حضّن المزيج مرة أخرى واقرأ النتائج. *يمكن أيضًا وسم الشريك B بالبيوتين، أو إضافة وسم، أو دمج Fc معه، أو وسمه مباشرةً. في هذه الحالات، استخدم كاشف HTRF المناسب (مضاد الوسم، مضاد النوع، بروتين A، ستربتأفيدين) الموسوم بالمانح للكشف.

قم ببناء اختبارات تفاعل HTRF لتطبيقك المحدد
تُباع الكواشف بحسب عدد الاختبارات (تفاعلات بحجم 20 ميكرولتر). تُورَّد الأجسام المضادة المرتبطة بـ XL665 أو d2 على أساس 20 نانوغرام من الجسم المضاد لكل بئر. كما يُذكر مقدار الجزء النشط لكل قارورة (بالإضافة إلى عدد المؤشرات لكل قارورة - انظر ورقة وصف المنتج). يُعرَّف الجزء النشط بأنه الجزء الفعال من المركب (مثل الجسم المضاد).

كيف يرتبط عدد الاختبارات بالجزء النشط؟
يعكس متوسط ​​كمية المادة المترافقة لكل بئر إجمالي محتوى المادة البيولوجية. يُفضل عمومًا استخدام كمية الجزء النشط بدلًا من كمية المادة المترافقة الكلية. بالنسبة للمواد المترافقة من نوع Cryptate وd2، تساوي كمية المادة المترافقة الكلية كمية الجزء النشط، نظرًا لأن الوزن الجزيئي للعلامة ضئيل. لا ينطبق هذا على الكيانات الموسومة بـ XL665، حيث تختلف كمية المادة المترافقة الكلية تبعًا للنسبة المولية النهائية للمادة المترافقة XL665، ومع ذلك، فإن كمية الجزء النشط، التي توفرها شركة Revvity، ثابتة وتعتمد على عدد الاختبارات المطلوبة.

الكميات الموصى بها من مركبات كريبتات وXL665
يجب ألا تكون كمية مُقترنات الكريبتات زائدة لتجنب تشبع جهاز القراءة وظهور مستوى غير مقبول من التشويش. في معظم الحالات، يكون تركيز الكريبتات من 1 إلى 5 نانومتر مناسبًا، وسيُنتج ما بين 20,000 و80,000 نبضة في الثانية عند 620 نانومتر، وذلك اعتمادًا على جهاز القراءة المُتوافق مع تقنية HTRF المُستخدم. يجب أن يُطابق مُقترن XL665 نظيره في التحليل قدر الإمكان لضمان وسم أكبر عدد من الجزيئات الحيوية بمستقبل XL665. لذا، للكشف عن جزيء موسوم بتركيز 20 نانومتر في التحليل، يجب أن يكون تركيز مضاد الوسم XL665 مُساويًا أو أعلى. تفاعل البروتين-التطبيق-البروتين
نقاط التحليل - 1000
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - القوارير
شروط الشحن - يتم الشحن في درجة حرارة الغرفة
الهدف-6HIS
اختبار ربط الفئة المستهدفة
تقنية TR-FRET
المجالات العلاجية: المناعة الذاتية، أمراض القلب والأوعية الدموية، الأمراض المعدية، الالتهابات، الأيض/السكري، التهاب الكبد الدهني غير الكحولي/التليف، علم الأعصاب، علم الأورام، الأمراض النادرة، علم الفيروسات
حجم الوحدة - 1000 نقطة تحليل