Product Description
ملخص
يُعدّ هذا الاختبار الخلوي لربط GTP/Gi طريقةً فلوريةً ومتجانسةً لقياس نشاط بروتين Gi في الخلايا على مستوى تبادل النيوكليوتيدات GDP/GTP الذي يُميّز تنشيط مستقبلات البروتين المقترن بـ G (GPCR). وبذلك، يتميّز هذا الاختبار بقدرته على رصد تنشيط مستقبلات GPCR عند مستوى إحدى أولى الأحداث التي تتوسطها المستقبلات. ومن ثمّ، يُقدّم هذا الاختبار نظرةً ثاقبةً على الجزء العلوي من إشارات مستقبلات GPCR، وهو أمرٌ مفيدٌ عند دراسة الاستجابات الوظيفية.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:
تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص ارتباط GTP Gi الخلوي
يُستخدم اختبار ارتباط GTP/Gi الخلوي للكشف البسيط والسريع والمباشر عن تنشيط بروتين Gαi في الخلايا المنفذة. وهو بمثابة قراءة أولية لتنشيط مستقبلات البروتين المقترن بـ G. يؤدي تنشيط هذه المستقبلات إلى تبادل نيوكليوتيدات GDP/GTP في الوحدة الفرعية Gα. يعتمد مبدأ هذا الاختبار على تقنية HTRF™، حيث يستخدم نظير GTP غير قابل للتحلل مرتبطًا بمانح كريبتات اليوروبيوم الفلوري.
عمليًا، يؤدي تحفيز مستقبلات البروتين المقترن بالبروتين ج (GPCR) بواسطة المُحفزات إلى تغيير في بنية بروتين Gα، واستبدال جزيء GDP المرتبط بـ Gα بنظير GTP الفلوري في جيب الارتباط المقابل. يُمكن الكشف عن ذلك بإضافة جسم مضاد أحادي النسيلة مُوسَم بـ d2 (مستقبل أحمر) مُضاد لـ Gαi. عند تقريب كريبتات اليوروبيوم وd2 من بعضهما، يُحفز انتقال الطاقة المُعتمد على الزمن بينهما إشارة TR-FRET عند d2. تتناسب هذه الإشارة النوعية مع حالة تنشيط Gαi. يُتيح هذا الاختبار التوصيف الدوائي المباشر للمركبات التي تعمل على مستقبلات Gαi المقترنة في الخلايا المُنفذة.
بروتوكول فحص ارتباط GTP Gi الخلوي
يُجرى اختبار ارتباط GTP/Gi الخلوي في شكل مصغر باستخدام حجم نهائي قدره 40 ميكرولتر، ويتميز ببروتوكول مبسط لإضافة الكواشف من أربع خطوات، حيث تُنفذ خطوات النفاذية والتحفيز والكشف تباعًا بعد زرع الخلايا لمدة 24 ساعة. تُقرأ النتائج بعد 4 ساعات أو حضانة في درجة حرارة الغرفة، وذلك حسب النموذج البيولوجي.
يجب تحديد الكثافة الخلوية المثلى، وتركيزات كلوريد المغنيسيوم، وفترات الحضانة قبل القراءة بناءً على النموذج البيولوجي المختار (النموذج الخلوي/المستقبل/المركب الدوائي). التطبيق: الكشف عن الرسول الثانوي
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
بروتين الهدف-جي
الفئة المستهدفة - مستقبلات البروتين المقترن بالبروتين ج
تقنية TR-FRET
المجالات العلاجية: أمراض القلب والأوعية الدموية، الأمراض المعدية، الالتهابات، الأيض/السكري، التهاب الكبد الدهني غير الكحولي/التليف، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات، الأمراض النادرة
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924