Product Description
ملخص
هذا المركب مشتق من السونيتينيب، وهو مثبط معروف لعائلتي مستقبلات التيروزين كيناز PDGF وVEGF. يُستخدم السونيتينيب، وهو مثبط تنافسي لكيناز ATP، كدواء لعلاج سرطان الخلايا الكلوية وأورام اللحمة المعدية المعوية المقاومة للإيماتينيب. وقد ثبت أنه يرتبط بتقارب أقل من 100 نانومتر مع حوالي 18% من الكينازات (سواء مستقبلات التيروزين كيناز أو سيرين/ثريونين). ولذلك، فهو مفيد لدراسة كينازات متعددة في منصة فحص ارتباط الكيناز بتقنية HTRF. يمتص صبغ الفلورسنت "d2" المستخدم الضوء عند طول موجي أقصى يقارب 650 نانومتر، ويتألق عند طول موجي يقارب 670 نانومتر. ويُستخدم كجزيء مستقبل في فحوصات HTRF.
يتم توفير Sunitinib-Red كمحلول بتركيز 25 ميكرومتر في DMSO.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:
تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص تحديد ثابت التفكك (Kd)
يتم الكشف عن ارتباط Sunitinib-Red في شكل فحص ساندويتش باستخدام Anti Tag الموسوم بـ Europium Cryptate (المانح)، والذي يرتبط بـ Kinase الموسوم، ومتتبع فلوري أحمر موسوم بـ d2 (المستقبل).
يعتمد مبدأ الكشف على تقنية HTRF®. ستزداد نسبة HTRF (665/620) بإضافة المزيد من المادة المتتبعة، وستصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المادة المتتبعة إلى الكيناز الموسوم.
لمعرفة ما إذا كان Sunitinib-Red هو المتتبع الأنسب لكينازك المحدد الذي يهمك، ننصحك بتجربة مجموعات اكتشاف ربط الكيناز.
بروتوكول فحص تحديد قيمة Kd
يمكن إجراء تجارب ربط التشبع لـ Sunitinib-Red في صفائح 96 أو 384 بئراً (حجم نهائي 20 ميكرولتر).
أولًا، تُحضّر سلسلة تخفيف تتراوح بين 0 و1 ميكرومول من سوتينيب-ريد في محلول ربط الكيناز في صفيحة غير رابطة ذات 96 بئرًا. بعد ذلك، يُوزّع 5 ميكرولتر من محلول ربط الكيناز في الصفيحة النهائية ذات 96 أو 384 بئرًا. ثم يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز الموسوم، يليه 5 ميكرولتر من مضاد الوسم Eu-cryptate. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول التتبع الأحمر.
يتم قياس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من الحضانة.
مبدأ فحص تحديد IC50/Ki
يتم الكشف عن ارتباط Sunitinib-Red في شكل فحص ساندويتش باستخدام جسم مضاد محدد لـ GST أو 6HIS أو Streptavidin موسوم بـ Europium Cryptate (المانح)، والذي يرتبط بـ Kinase الموسوم، و Sunitinib أحمر فلوري موسوم بـ d2 (المستقبل).
يعتمد مبدأ الكشف على تقنية HTRF®. ستزداد نسبة HTRF (665/620) بإضافة المزيد من Sunitinib-Red، وستصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) Sunitinib-Red مع الكيناز الموسوم.
عند إضافة مثبط للكيناز، سيتم إزاحة Sunitinib-Red وستختفي إشارة HTRF، اعتمادًا على الجرعة.
بروتوكول فحص تحديد IC50/Ki
يمكن إجراء التقييم الدوائي للمثبطات ذات الأهمية في صفائح ذات 96 أو 384 بئراً.
أولًا، تُحضّر سلسلة تخفيف للمثبط تتراوح تراكيزها بين 40 ميكرومولار و0.23 نانومولار، ويُوزّع 5 ميكرولتر من كل تركيز في الصفيحة. بعد ذلك، يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز الموسوم، ثم 5 ميكرولتر من مضاد الوسم Eu-cryptate. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول Sunitinib-Red، المُحضّر بتركيز أربعة أضعاف التركيز النهائي. تُقاس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من التحضين.
تُظهر تحليلات البيانات منحنيات استجابة نموذجية للجرعة تتراوح بين 10 ميكرومتر و56 بيكومتر، مما يُتيح تقييم قيم IC50/Ki للمثبط محل الاهتمام. التطبيق: فحص إنزيمي كيميائي حيوي
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - كاشف فلوري
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - الكينازات
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 20 نانومول
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924