Product Description
ملخص
يرتبط مثبط الكيناز الأكثر شهرة، جليفيك (إيماتينيب)، بشكل غير نشط من Abl. ولذلك، يصعب اكتشاف هذه المثبطات باستخدام المقايسات القائمة على النشاط، لذا من المفيد إعداد مقايسات ارتباط الكيناز للكيناز الذي يهمك لتجنب تفويت هذه المركبات.
يمكن إعداد فحوصات ربط الكيناز HTRF® بسهولة، باستخدام تنسيق الكشف عن طريق المزج والقياس في غياب ATP.
يتم قياس الإزاحة المباشرة للمثبط الفلوري من جيب ربط ATP، مما يتيح تحديد تقارب المثبط الخاص بك عن طريق إجراء منحنيات استجابة الجرعة.
إن تحضير الكيناز المنقى أقل أهمية مقارنة بالفحوصات الإنزيمية، حيث يمكن إجراء القياسات على الكينازات التي لديها نشاط ضئيل أو معدوم.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص مجموعة اكتشاف الكيناز-GST
يتم الكشف عن ارتباط المواد المتتبعة باستخدام اختبار ساندويتش، وذلك باستخدام جسم مضاد نوعي لـ GST مُوسَم بـ Europium Cryptate (المانح)، والذي يرتبط بـ Kinase المُوسَم بـ GST، ومادة متتبعة فلورية حمراء مُوسَمة بـ d2 (المستقبل). تزداد نسبة HTRF (665/620) مع زيادة كمية المادة المتتبعة، وتصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المادة المتتبعة مع Kinase المُوسَم بـ GST. تساعد مجموعة اكتشاف ارتباط Kinase-GST في تحديد المادة المتتبعة الأنسب لإعداد اختبار الارتباط. سيتم اختيار المادة المتتبعة ذات أفضل خصائص الاختبار (بناءً على قيمة Kd ونافذة الاختبار المُولَّدة) لإجراء اختبارات الارتباط التنافسية.
بروتوكول فحص مجموعة اكتشاف الكيناز-GST
يمكن إجراء تجارب ارتباط التشبع باستخدام المؤشرات الثلاثة (أي ستاوروسبورين-أحمر، داساتينيب-أحمر، وسونيتينيب-أحمر) على صفائح ذات 96 أو 384 بئرًا (بحجم نهائي 20 ميكرولتر). أولًا، يتم تحضير سلسلة تخفيف تتراوح بين 0 و1 ميكرومول من المؤشر في محلول ارتباط الكيناز في صفيحة غير مرتبطة ذات 96 بئرًا. بعد ذلك، يتم توزيع 5 ميكرولتر من محلول ارتباط الكيناز في الصفيحة النهائية ذات 96 أو 384 بئرًا. ثم يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز الموسوم بـ GST، متبوعًا بـ 5 ميكرولتر من مضاد GST Eu-cryptate. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول المؤشر الأحمر. يتم قياس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من الحضانة. التطبيق: فحص إنزيمي كيميائي حيوي
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - الكينازات
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - وحدة واحدة
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924