Product Description
ملخص
يرتبط مثبط الكيناز الأكثر شهرة، جليفيك (إيماتينيب)، بشكل غير نشط من Abl. ولذلك، يصعب اكتشاف هذه المثبطات باستخدام المقايسات القائمة على النشاط، لذا من المفيد إعداد مقايسات ارتباط الكيناز للكيناز الذي يهمك لتجنب تفويت هذه المركبات.
علاوة على ذلك، فإن فحوصات ربط كيناز HTRF® سهلة الإعداد، باستخدام تنسيق الكشف عن طريق المزج والقياس في غياب ATP.
يتم قياس الإزاحة المباشرة للمثبط الفلوري من جيب ربط ATP، مما يتيح تحديد مدى تقارب المثبط الخاص بك عن طريق إجراء منحنيات استجابة الجرعة.
إن تحضير الكيناز المنقى أقل أهمية مقارنة بالفحوصات الإنزيمية، حيث يمكن إجراء القياسات على الكينازات التي لديها نشاط ضئيل أو معدوم.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص مجموعة اكتشاف الكيناز-بيوتين
يُكشف عن ارتباط المواد المتتبعة باستخدام اختبار ساندويتش، وذلك باستخدام ستربتأفيدين محدد مُوسَم بكريبتات اليوروبيوم (المانح)، والذي يرتبط بالكيناز المُبَيوْتَن الطرفي N، ومادة متتبعة فلورية حمراء مُوسَمة بـ d2 (المستقبل). تزداد نسبة HTRF (665/620) مع زيادة كمية المادة المتتبعة، وتصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المادة المتتبعة مع الكيناز المُبَيوْتَن الطرفي N. تساعد مجموعة اكتشاف ارتباط الكيناز-بيوتين في تحديد المادة المتتبعة الأنسب لإجراء اختبار الارتباط. تُختار المادة المتتبعة ذات أفضل خصائص الاختبار (بناءً على قيمة Kd ونافذة الاختبار المُولَّدة) لإجراء اختبارات الارتباط التنافسي.
بروتوكول فحص مجموعة اكتشاف الكيناز-بيوتين
يمكن إجراء تجارب ارتباط التشبع على المؤشرات الثلاثة (أي ستاوروسبورين-أحمر، داساتينيب-أحمر، وسونيتينيب-أحمر) في صفائح ذات 96 أو 384 بئرًا (بحجم نهائي 20 ميكرولتر). أولًا، تُحضّر سلسلة تخفيف للمؤشر تتراوح بين 0 و1 ميكرومولار في محلول ارتباط الكيناز في صفيحة غير مرتبطة ذات 96 بئرًا. بعد ذلك، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول ارتباط الكيناز إلى الصفيحة النهائية ذات 96 أو 384 بئرًا. ثم يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز المُؤَشَّر بالبيوتين في الطرف الأميني، يليه 5 ميكرولتر من ستربتأفيدين يو-كريبتات. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول المؤشر الأحمر. تُقاس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من الحضانة. التطبيق: فحص إنزيمي كيميائي حيوي
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - الكينازات
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - وحدة واحدة
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924