Revvity، 62KBHISKAB، HTRF MAb Anti 6HIS-Eu cryptate Kinase Binding Kit، 20000 نقطة اختبار

ملخص
إن الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد لكيناز الكريبتات 6HIS-Eu هو جسم مضاد من نوع IgG2a تم إنتاجه ضد بروتين اندماجي موسوم بالبولي هيستيدين وموسوم باليوروبيوم. وقد ثبت أنه يتفاعل مع الكينازات الموسومة بـ 6HIS.
هذا الكاشف مخصص للاستخدام في منصة ربط كيناز HTRF الكيميائية الحيوية.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:

تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص تحديد ثابت التفكك (Kd)
يتم الكشف عن ارتباط المواد المتتبعة باستخدام اختبار ساندويتش، وذلك باستخدام جسم مضاد لـ 6HIS موسوم بـ Europium Cryptate (المانح)، والذي يرتبط بالكيناز الموسوم بـ 6HIS، ومادة متتبعة فلورية حمراء موسومة بـ d2 (المستقبل). يعتمد مبدأ الكشف على تقنية HTRF®. تزداد نسبة HTRF (665/620) بإضافة المزيد من المادة المتتبعة، وتصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المادة المتتبعة مع الكيناز الموسوم بـ 6HIS.

بروتوكول فحص تحديد قيمة Kd
يمكن إجراء تجارب ارتباط التشبع على المؤشرات الثلاثة (أي ستاوروسبورين-أحمر، داساتينيب-أحمر، وسونيتينيب-أحمر) في صفائح ذات 96 أو 384 بئرًا (بحجم نهائي 20 ميكرولتر). أولًا، تُحضّر سلسلة تخفيف للمؤشر تتراوح بين 0 و1 ميكرومولار في محلول ارتباط الكيناز في صفيحة غير مرتبطة ذات 96 بئرًا. بعد ذلك، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول ارتباط الكيناز إلى الصفيحة النهائية ذات 96 أو 384 بئرًا. ثم يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز الموسوم بـ 6HIS، يليه 5 ميكرولتر من مضاد 6HIS Eu-cryptate. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول المؤشر الأحمر. تُقاس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من التحضين.

مبدأ فحص تحديد IC50/Ki
مبدأ فحص ارتباط الكيناز بتقنية HTRF® (تحديد IC50/Ki). يُكشف عن ارتباط المواد المتتبعة في فحص ساندويتش باستخدام مضاد 6HIS الموسوم بكريبتات اليوروبيوم (المانح)، الذي يرتبط بالكيناز الموسوم، ومتتبع فلوري أحمر موسوم بـ d2 (المستقبل). يعتمد مبدأ الكشف على تقنية HTRF®. تزداد نسبة HTRF (665/620) بإضافة المزيد من المتتبع، وتصل إلى التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المتتبع مع الكيناز الموسوم. عند إضافة مثبط للكيناز، يُزاح المتتبع وتختفي إشارة HTRF، وذلك تبعًا للجرعة.

بروتوكول فحص تحديد IC50/Ki
يمكن إجراء التقييم الدوائي للمثبطات محل الاهتمام في صفائح ذات 96 أو 384 بئرًا. في البداية، تُحضّر سلسلة تخفيف تتراوح بين 40 ميكرومولار و0.23 نانومولار من المثبط، ويُوزّع 5 ميكرولتر من كل تركيز في الصفيحة. بعد ذلك، يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز الموسوم، ثم 5 ميكرولتر من مضاد 6HIS Eu-cryptate. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول التتبع، المُحضّر بتركيز أربعة أضعاف التركيز النهائي. تُقاس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من التحضين. تُظهر تحليلات البيانات منحنيات استجابة للجرعة نموذجية تتراوح بين 10 ميكرومولار و56 بيكومولار، مما يُتيح تقييم قيم IC50/Ki للمثبط محل الاهتمام. التطبيق: فحص إنزيمي كيميائي حيوي
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - كاشف فلوري
حجم العينة - 5 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - الكينازات
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 20000 نقطة تحليل