Product Description
ملخص
تم وسم الستربتافيدين بكريبات اليوروبيوم. يرتبط البيوتين بالستربتافيدين بألفة عالية (Ka=10^15 M-1). هذا الارتباط سريع ومستقر، مما يجعله خيارًا مثاليًا للاستخدام في منصة ربط كيناز HTRF الكيميائية الحيوية.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:
تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص تحديد ثابت التفكك (Kd)
يتم الكشف عن ارتباط المواد المتتبعة باستخدام تقنية الساندويتش، وذلك باستخدام ستربتأفيدين موسوم بكريبتات اليوروبيوم (المانح)، الذي يرتبط بالطرف الأميني لكيناز البيوتينيلاتي، ومتتبع فلوري أحمر موسوم بـ d2 (المستقبل). يعتمد مبدأ الكشف على تقنية HTRF®. تزداد نسبة HTRF (665/620) مع زيادة كمية المتتبع، وتصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المتتبع مع الطرف الأميني لكيناز البيوتينيلاتي.
بروتوكول فحص تحديد قيمة Kd
يمكن إجراء تجارب ارتباط التشبع على المؤشرات الثلاثة (أي ستاوروسبورين-أحمر، داساتينيب-أحمر، وسونيتينيب-أحمر) في صفائح ذات 96 أو 384 بئرًا (بحجم نهائي 20 ميكرولتر). أولًا، تُحضّر سلسلة تخفيف للمؤشر تتراوح بين 0 و1 ميكرومولار في محلول ارتباط الكيناز في صفيحة غير مرتبطة ذات 96 بئرًا. بعد ذلك، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول ارتباط الكيناز إلى الصفيحة النهائية ذات 96 أو 384 بئرًا. ثم يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز المُؤَشَّر بالبيوتين في الطرف الأميني، يليه 5 ميكرولتر من ستربتأفيدين يو-كريبتات. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول المؤشر الأحمر. تُقاس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من التحضين.
مبدأ فحص تحديد IC50/Ki
مبدأ فحص ارتباط الكيناز بتقنية HTRF® (تحديد IC50/Ki). يُكشف عن ارتباط المواد المتتبعة في فحص ساندويتش باستخدام ستربتأفيدين مُوسَم بكريبتات اليوروبيوم (المانح)، الذي يرتبط بالكيناز الموسوم، ومادة متتبعة فلورية حمراء مُوسَمة بـ d2 (المستقبل). يعتمد مبدأ الكشف على تقنية HTRF®. تزداد نسبة HTRF (665/620) بإضافة المزيد من المادة المتتبعة، وتصل إلى حد التشبع اعتمادًا على ثابت تفكك (Kd) المادة المتتبعة مع الكيناز الموسوم. عند إضافة مُثبِّط للكيناز، تُزاح المادة المتتبعة ويختفي إشارة HTRF، وذلك تبعًا للجرعة.
بروتوكول فحص تحديد IC50/Ki
يمكن إجراء التقييم الدوائي للمثبطات محل الاهتمام في صفائح ذات 96 أو 384 بئرًا. في البداية، تُحضّر سلسلة تخفيف للمثبط تتراوح بين 40 ميكرومولار و0.23 نانومولار، ويُوزّع 5 ميكرولتر من كل تركيز في الصفيحة. بعد ذلك، يُضاف 5 ميكرولتر من الكيناز الموسوم، ثم 5 ميكرولتر من ستربتأفيدين يو-كريبتات. أخيرًا، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول التتبع، المُحضّر بتركيز يعادل أربعة أضعاف التركيز النهائي. تُقاس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من التحضين. تُظهر تحليلات البيانات منحنيات استجابة نموذجية للجرعة تتراوح بين 10 ميكرومولار و56 بيكومولار، مما يُتيح تقييم قيم IC50/Ki للمثبط محل الاهتمام. التطبيق: فحص إنزيمي كيميائي حيوي
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - كاشف فلوري
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - الكينازات
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 20000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924