مجموعة اختبار Revvity، 62SAHPEB، HTRF EPIgeneous Methyltransferase، 1000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ اختبار ناقلة الميثيل فوق الجينية حلاً شاملاً لجميع ناقلات الميثيل وركائزها (الببتيدات، والنيوكليوسومات، والهيستونات الكاملة، والحمض النووي DNA، والحمض النووي RNA، والبروتين p53، والجزيئات الصغيرة). ويتم الكشف عن طريق قياس تحويل S-أدينوزيل هوموسيستين (SAH) من S-أدينوزيل ميثينيونين (SAM) بواسطة ناقلات الميثيل. يتوافق هذا الاختبار مع معظم الإنزيمات التي تتراوح قيمة ثابت ميكايليس-مينتين (Km) لها مع SAM بين 0.4 ميكرومول و200 ميكرومول. ويُوفّر هذا الاختبار بديلاً فريداً وفعّالاً للتحليل الإشعاعي.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:

تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ الخطوة الإنزيمية
يُعدّ اختبار ميثيل ترانسفيراز الإبيجيني اختبارًا كيميائيًا حيويًا شاملًا لجميع الإنزيمات ضمن عائلتي ميثيل ترانسفيراز الهيستون (HMTs) والحمض النووي (DNMTs) التي تُنتج S-أدينوزيل هوموسيستين (SAH). ويتم تقييم نشاط الميثيل ترانسفيراز عن طريق قياس تحويل SAM (S-5-أدينوزيل-L-ميثيونين) إلى SAH.

مبدأ خطوة الكشف
لقياس إطلاق SAH مباشرةً، يُستخدم جسم مضاد لـ SAH مُوسَم بـ Tb cryptate ومُتتبِّع SAH-d2. يتنافس SAH المُطلق من التفاعل الإنزيمي مع SAH-d2 المُوسَم، مما يؤدي إلى انخفاض إشارة HTRF.

بروتوكول الفحص
يُحضن الركيزة مع الإنزيم بوجود مركبات. يُضاف SAM (مانح CH3) لبدء التفاعل الإنزيمي المؤدي إلى مثيلة الركيزة. يتنافس الجسم المضاد النوعي لـ SAH والموسوم بـ Tb cryptate مع كل من SAH الأصلي وSAH المرتبط بـ d2. تتناسب إشارة TR-FRET الناتجة عكسيًا مع تركيز SAH في المعاير أو في العينة. التطبيق: فحص إنزيمي كيميائي حيوي
العلامة التجارية-إيبيجينوس
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 120 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الفئة المستهدفة - علم التخلق
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 1000 نقطة تحليل