Product Description
ملخص
يُمكّن اختبار مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية من الكشف عن مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية. يتم تحفيز مستقبلات الأنسولين بواسطة الأنسولين وعوامل النمو الشبيهة بالأنسولين، وتشارك في العديد من المسارات مثل مسارات إشارات الأنسولين وFoxO.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:
تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية
يقيس اختبار مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية مستوى التعبير عن مستقبلات الأنسولين بيتا في مستخلص خلوي. وعلى عكس اختبار ويسترن بلوت، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام أو الفصل الكهربائي أو النقل. يستخدم اختبار مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية جسمين مضادين موسومين: أحدهما مرتبط بفلوروفور مانح، والآخر بفلوروفور مستقبل. يتميز كلا الجسمين المضادين بتخصص عالٍ تجاه جزء محدد من البروتين. في وجود مستقبلات الأنسولين بيتا في مستخلص خلوي، يؤدي إضافة هذه المركبات إلى تقريب الفلوروفور المانح من المستقبل، مما يُولد إشارة نقل طاقة رنين فلوري (FRET). تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع تركيز البروتين الموجود في العينة، مما يوفر وسيلة لتقييم التعبير عن البروتينات دون الحاجة إلى غسل.
بروتوكول فحص مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية على لوحين
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن مستقبلات الأنسولين الكلية بيتا HTRF. يُمكّن هذا البروتوكول من مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.
بروتوكول فحص مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية 1
يمكن الكشف عن مستقبلات الأنسولين بيتا الكلية باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية.
رسم توضيحي لـ Total-IRβ (Tyr1150/1151) على HepaRG
زُرعت خلايا HepaRG بمعدل 200,000 خلية لكل بئر في صفيحة ذات 96 بئرًا. بعد حضانة لمدة 5 أيام عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون، أُضيف تخفيف متسلسل للأنسولين إلى الخلايا بوجود بيرفانادات بتركيز 30 ميكرومولار لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. أُزيل وسط التحفيز من الخلايا، وأُضيف 50 ميكرولتر من محلول التحلل. تمت عملية التحلل بالرجّ الخفيف لمدة 30 دقيقة. نُقل 16 ميكرولتر من العينات إلى صفيحة ذات 384 بئرًا صغيرة الحجم، ثم أُضيف 4 ميكرولتر من كواشف الكشف عن فوسفات مستقبلات الأنسولين بيتا HTRF. في الوقت نفسه، وُزّع 16 ميكرولتر في آبار أخرى، بينما أُضيف 4 ميكرولتر من كواشف الكشف عن مستقبلات الأنسولين بيتا HTRF الكلية. سُجّلت الإشارات طوال الليل.
مقارنة إجمالي IRβ WB
تمت زراعة خلايا Hek 293 البشرية حتى وصلت إلى كثافة 80%. بعد المعالجة المشتركة بالأنسولين والبيرفانادات، تم تحليل الخلايا وجمع السائل الطافي الذائب عن طريق الطرد المركزي. أُجريت تخفيفات متسلسلة من مستخلص الخلية، ونُقل 16 ميكرولتر من كل تخفيف إلى صفيحة ميكروية بيضاء ذات 384 بئرًا ذات حجم منخفض، قبل إضافة كواشف مجموعة HTRF الخلوية للكشف عن الفسفو-IRβ. أظهرت مقارنة مباشرة أن فحص HTRF للفسفوهة أكثر حساسية بثمانية أضعاف على الأقل من فحص Western Blot. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: علم الأعصاب المتعلق بالأيض/السكري
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924