مجموعة Revvity، 64BDKRASWPEG، HTRF KRAS WT / GTP Binding Kit، 500 نقطة اختبار

ملخص
طريقة سريعة وسهلة لتحديد منافسي KRAS WT/GTP الجدد. KRAS هو بروتين GTPase صغير يشارك في العديد من العمليات البيولوجية، مثل تكاثر الخلايا وبقائها واستقلابها. من المعروف أن هذا الجين الأولي المسرطن يتعرض للطفرات في العديد من أنواع السرطان الفرعية، مما يؤدي إلى تكاثر غير منضبط وتعديلات في استقلاب الخلايا. وبالتالي، يساهم في تأثير واربورغ في الخلايا السرطانية. ومثل غالبية بروتينات GTPase الصغيرة، يرتبط KRAS بـ GDP في حالته غير النشطة، أو يرتبط بـ GTP للتحول إلى حالته النشطة. يُعد KRAS G12C أحد أكثر أشكال الطفرات شيوعًا في السرطان، والذي يؤدي إلى حالة نشطة دائمة لـ KRAS. لذلك، يُعد تحديد منافسي KRAS/GTP الجدد استراتيجية مهمة للتحكم في العمليات البيولوجية المشاركة في نمو السرطان عن طريق تقليل نشاط KRAS، بالإضافة إلى المسارات المرتبطة به.
كيف يعمل؟
مبدأ الفحص
يُجرى اختبار ارتباط KRAS بـ GTP بتقنية HTRF بطريقة تنافسية، باستخدام كاشف GTP-Red كربيطة لبروتين KRAS WT، وبروتين KRAS WT بشري موسوم بـ 6His، وجسم مضاد موسوم بـ 6His Cryptate. يتنافس المركب قيد الاختبار مع كاشف GTP Red، وبالتالي يمنع حدوث نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET).

بروتوكول الفحص
يمكن إجراء اختبار ارتباط بروتين KRAS البشري الطبيعي في صفيحة بيضاء ذات حجم منخفض (20 ميكرولتر نهائي) مكونة من 96 أو 384 بئرًا. وكما هو موضح هنا، تُوزع العينات أو المعايير مباشرةً في صفيحة الاختبار. ثم يُضاف بروتين KRAS البشري الطبيعي المُوسوم بالهيستيدين، يليه توزيع كواشف HTRF: الجسم المضاد 6His المُوسوم بكريبتات اليوروبيوم وكاشف GTP-Red. يمكن مزج الكواشف المُوسومة بفلوروفورات HTRF مسبقًا وإضافتها في خطوة توزيع واحدة. لا حاجة لخطوات غسل. يمكن تصغير البروتوكول أو توسيعه بشكل أكبر ببساطة عن طريق تغيير حجم كل إضافة تناسبياً. تفاعل التطبيق مع البروتين.
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 2 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
اختبار ربط الفئة المستهدفة
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل