ريفيتي، 64BDVHLRED، HTRF VHL ريد ليجاند

ملخص
يهدف HTRF VHL-Red Ligand في المقام الأول إلى إجراء منحنيات ارتباط التقارب لبروتين VHL باستخدام تقنية HTRF®.
يُعدّ بروتين VHL، المعروف أيضًا باسم فون هيبل-لينداو، أحد البروتينات المشاركة في العديد من العمليات البيولوجية، ويرتبط ارتباطًا وثيقًا بتنظيم تكوين الأوعية الدموية، ونمو الخلايا، وبقائها. ويُعتبر VHL من أشهر إنزيمات E3 ليغاز التي تستخدمها بروتينات PROTAC ثنائية الوظيفة لتحفيز إضافة اليوبيكويتين إلى البروتينات المستهدفة، ومن ثمّ تحللها بواسطة البروتيازوم. يتفاعل VHL مع العديد من البروتينات لتكوين مُركّب فون هيبل-لينداو الوظيفي لإضافة اليوبيكويتين، حيث يبدو أن VHL يعمل كوحدة فرعية لجذب البروتينات المستهدفة في مُركّب إنزيم E3 ليغاز، ويستهدف بروتينات مُختلفة للتحلل البروتيني، مثل عامل نقص الأكسجين المُحفّز (HIF) المُهدرج في ظل ظروف الأكسجة الطبيعية.
إن تحديد روابط PROTAC VHL الجديدة يمكن أن يحسن التحلل الانتقائي المعتمد على البروتيازوم للبروتينات ذات الأهمية التي تشارك في ظهور أمراض مثل السرطانات.
يُستخدم مُرَشِّح HTRF VHL-Red Ligand بشكل أساسي لإجراء دراسات الارتباط التعاوني. فهو يُتيح حساب ألفة VHL-Red Ligand لبروتين VHL في وجود البروتين المستهدف. ويُمكّن تحديد قيمتي Bmax وKd لـ HTRF VHL-Red Ligand لبروتين VHL، في غياب ووجود البروتين المستهدف، من إجراء التحليل الأولي الدقيق اللازم لدراسة التأثيرات التعاونية التي يتم تقييمها باستخدام مجموعة HTRF Human VHL Binding Kit.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص ارتباط الليجاند HTRF VHL
يُكشف عن ارتباط HTRF VHL-Red Ligand في اختبار ارتباط مباشر، باستخدام جسم مضاد لـ 6His-Europium Cryptate يرتبط بمركب بروتين VHL البشري الموسوم بـ 6His. عندما تكون الأصباغ متقاربة، يؤدي إثارة المانح بمصدر ضوئي (ليزر أو مصباح وميض) إلى نقل طاقة رنين فلوري (FRET) نحو المستقبل، الذي بدوره يُصدر فلورة عند طول موجي محدد (665 نانومتر) (الصورة أ). تُحسب إشارة الارتباط النوعي بطرح إشارة الارتباط غير النوعي من الإشارة الكلية، مما يُتيح تحديد ثابت التفكك (Kd) لـ HTRF VHL Red Ligand (الصورة ب).

بروتوكول فحص ارتباط الليجاند HTRF VHL-Red
يمكن إجراء تجارب ارتباط تشبع VHL باستخدام HTRF VHL-Red Ligand في صفائح ذات 384 بئراً، وذلك بإضافة 5 ميكرولتر من محلول التخفيف 9 (للارتباط الكلي) أو معيار ارتباط VHL (للارتباط غير النوعي). ثم يُضاف 5 ميكرولتر من محلول PROTAC Binding Buffer 1 (كمرجع) أو البروتين المستهدف المخفف في محلول PROTAC Binding Buffer 1 (لدراسات التعاونية)، يليه 5 ميكرولتر من مركب بروتين VHL الموسوم بـ 6His. وأخيراً، يُضاف 5 ميكرولتر من محلول مُجهز مسبقاً من HTRF VHL-Red Ligand وجسم مضاد Europium cryptate المضاد لـ 6His.
يتم قياس نسبة HTRF بعد ساعة واحدة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة. متوافق مع التشغيل الآلي - نعم
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - كاشف فلوري
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الالتهاب، علم الأعصاب، الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - وحدة واحدة