Product Description
ملخص
تُعدّ السمية الخلوية المعتمدة على المُتمِّم (CDC) وظيفةً فعّالةً مهمةً للأجسام المضادة. يبدأ تنشيط المسار الكلاسيكي للمُتمِّم بارتباط بروتين المُتمِّم C1q بمنطقة Fc للغلوبولينات المناعية المرتبطة بمستضد مستهدف على سطح الخلية. يُحفِّز هذا التفاعل التنشيط الإنزيمي المتسلسل لبروتينات المُتمِّم الدائرة في الدم، ويؤدي في النهاية إلى تكوين مُركَّب مهاجمة الغشاء (MAC) الذي يتوسط في تحلل الخلية المستهدفة.
تؤثر قدرة ارتباط C1q وما ينتج عنها من نشاط CDC على سلامة وفعالية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة العلاجية، ولذا يتطلب الأمر توصيفها خلال عملية التطوير. ويُعد تعديل منطقة Fc من الأجسام المضادة IgG (عن طريق الطفرات أو الهندسة السكرية مثلاً) مجالاً بحثياً نشطاً حالياً لتعزيز أو تقليل قدرة المنتجات البيولوجية على استقطاب المتممة.
تقوم مجموعة ربط C1q البشري بقياس ارتباط منطقة Fc من الأجسام المضادة IgG المتجمعة بـ C1q البشري في المحلول.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:
تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص ارتباط البروتين C1q البشري بتقنية HTRF
يقيس اختبار ارتباط HTRF Human C1q ارتباط منطقة Fc من الأجسام المضادة IgG ببروتين C1q البشري في محلول منظم. على عكس الطرق التقليدية التي تتطلب تثبيت الأجسام المضادة على سطح صلب، يتيح هذا الاختبار توصيفًا بسيطًا وسريعًا للأجسام المضادة في شكل عام متجانس. يُستخدم جسم مضاد Fab مضاد لـ IgG البشري مُرتبط بالبيوتين ومُعقد مع الستربتافيدين لالتقاط وتجميع الجسم المضاد المختبر في المحلول. يتم الكشف عن الأجسام المضادة المرتبطة ببروتين C1q البشري في اختبار ساندويتش باستخدام جسم مضاد مضاد لـ C1q مُوسوم بـ Eu3+ كريبتات (المانح)، والستربتافيدين المُوسوم بـ d2 (المستقبل). يؤدي التفاعل بين الشريكين إلى تقريب الفلوروفور المانح من المستقبل، مما يُولد إشارة FRET. تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع قدرة منطقة Fc من الجسم المضاد على التفاعل مع بروتين C1q البشري.
بروتوكول فحص ارتباط HTRF البشري C1q
يمكن إجراء اختبار ارتباط C1q البشري في صفيحة بيضاء ذات حجم منخفض (20 ميكرولتر نهائي) مكونة من 96 أو 384 بئرًا. يتطلب الاختبار خطوة حضانة واحدة فقط بعد الإضافة المتسلسلة لكواشف الاختبار. كما هو موضح هنا، تُضاف الأجسام المضادة المختبرة (أو المعيار) مباشرةً إلى صفيحة الاختبار. ثم يُضاف المزيج المُسبق [مضاد IgG-Fab-بيوتين بشري + ستربتأفيدين-d2]، يليه إضافة بروتين C1q البشري والجسم المضاد لـ C1q الموسوم بـ Eu3+ Cryptate. بعد حضانة لمدة 3 ساعات في درجة حرارة الغرفة، يمكن تسجيل إشارة FRET على قارئ متوافق مع HTRF. لا حاجة لخطوات غسل. يمكن تصغير البروتوكول أو توسيعه بشكل أكبر ببساطة عن طريق تغيير حجم كل إضافة تناسبياً. تفاعل التطبيق-البروتين-البروتين
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 5 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
اختبار ربط الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الالتهابات - علم الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924