Product Description
ملخص
يكشف هذا الفحص الخلوي القائم على تقنية HTRF عن CDK1 المفسفر عند Thr14 بسهولة ودقة.
إنزيم CDK1 (كيناز معتمد على السيكلين 1) هو أحد أفراد عائلة كينازات السيكلين المعتمدة (CDKs) التي تُنسق تقدم دورة الخلية في خلايا الثدييات (وتشمل أيضًا CDK1 وCDK4 وCDK6). يُعد CDK1 وحدةً فرعيةً محفزةً لكيناز بروتيني يُسمى عامل تحفيز الطور M، والذي يحفز دخول الخلية في الانقسام المتساوي. يُعزز CDK1 الانتقال من طور G2 إلى طور M، وينظم تقدم طور G1 والانتقال من طور G1 إلى طور S عبر ارتباطه بالعديد من السيكلينات في الطور البيني (السيكلين A والسيكلين B). يمكن لكينازات البروتين Wee1 وMyt1 أن تُجري عملية الفسفرة عند الثريونين 14 والتيروسين 15، مما يؤدي إلى تثبيط CDK1. قد يكون إنزيم الفوسفاتاز cdc25 مسؤولاً عن إزالة الفوسفات من الثريونين 14 والتيروسين 15، وما يتبع ذلك من تنشيط CDK1.
يُعدّ تثبيط فسفرة CDK1 عند الثريونين 14 ضروريًا للحفاظ على سلامة الجينوم ومنع تلف الحمض النووي خلال طور S. ولذلك، يُمثّل محور Wee1/Cdc25A هدفًا واعدًا لعلاج السرطان، وقد يُمثّل نهجًا فريدًا لزيادة حساسية الخلايا السرطانية ذات CDK1 المفرط النشاط.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص فوسفو-CDK1 (Thr14)
يقيس اختبار فوسفو-CDK1 (Thr14) مستوى CDK1 عند فسفرته عند Thr14. على عكس اختبار ويسترن بلوت، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام أو الفصل الكهربائي أو النقل. يستخدم الاختبار جسمين مضادين، أحدهما موسوم بصبغة فلورية مانحة والآخر بصبغة مستقبلة. تم اختيار الجسم المضاد الأول لقدرته على الارتباط النوعي بالوحدة الفسفورية على البروتين، بينما تم اختيار الثاني لقدرته على التعرف على البروتين بغض النظر عن حالة فسفرته. تُتيح فسفرة البروتين تكوين معقد مناعي يضم كلا الجسمين المضادين الموسومين، مما يُقرّب الصبغة الفلورية المانحة من المستقبلة، وبالتالي يُولّد إشارة نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET). تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع تركيز البروتين المفسفر في العينة، مما يوفر وسيلة لتقييم حالة فسفرة البروتين دون الحاجة إلى غسل العينة.
بروتوكول فحص ثنائي الألواح لـ Phospho-CDK1 (Thr14)
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن فوسفو-CDK1 (Thr14) بتقنية HTRF. يُمكّن هذا البروتوكول من مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.
بروتوكول فحص أحادي اللوحة لـ Phospho-CDK1 (Thr14)
يمكن الكشف عن CDK1 المُفسفر (Thr14) باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يُمكّن هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية من تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
توافق محلول التحلل - محلول التحلل 1 محلول التحلل 4
التعديل الجزيئي - الفسفرة
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تقنية TR-FRET
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924