Product Description
ملخص
يكشف هذا الفحص الخلوي بتقنية HTRF بسهولة ودقة عن CDK2 المفسفر عند Tyr15.
إنزيم CDK2 (كيناز معتمد على السيكلين 2) هو أحد أفراد عائلة كينازات السيكلين المعتمدة على السيكلين (CDKs) التي تُنسق تقدم دورة الخلية في خلايا الثدييات (وتشمل أيضًا CDK1 وCDK4 وCDK6). يُنشط CDK2 من خلال تفاعله مع السيكلين E والسيكلين A خلال المرحلة G1 المتأخرة والمرحلة S على التوالي، كما يُنظم أيضًا بواسطة موقعين رئيسيين للفسفرة. تُثبط الفسفرة عند Tyr15 بواسطة كيناز Wee1 عملية تنشيطه عن طريق منع ارتباط ATP، بينما يُعد نزع الفسفرة عند Tyr15 بواسطة الفوسفاتاز Cdc25A والفسفرة عند Thr160 بواسطة كيناز CAK (كيناز مُنشط CDK) ضروريين لنشاطه الكامل.
يُعدّ تثبيط فسفرة CDK2 عند Tyr15 ضروريًا للحفاظ على سلامة الجينوم ومنع تلف الحمض النووي خلال طور S. ولذلك، يُمثّل محور Wee1/Cdc25A هدفًا واعدًا لعلاج السرطان، وقد يُمثّل نهجًا فريدًا لزيادة حساسية الخلايا السرطانية ذات CDK2 المفرط النشاط.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص فوسفو-CDK2 (Tyr15)
يقيس اختبار فوسفو-CDK2 (Tyr15) مستوى CDK2 عند فسفرته عند Tyr15. على عكس اختبار ويسترن بلوت، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام أو الفصل الكهربائي أو النقل. يستخدم الاختبار جسمين مضادين، أحدهما موسوم بصبغة فلورية مانحة والآخر بصبغة مستقبلة. تم اختيار الجسم المضاد الأول لقدرته على الارتباط النوعي بالوحدة المفسفرة على البروتين، بينما تم اختيار الثاني لقدرته على التعرف على البروتين بغض النظر عن حالة فسفرته. تُتيح فسفرة البروتين تكوين معقد مناعي يضم كلا الجسمين المضادين الموسومين، مما يُقرّب الصبغة الفلورية المانحة من المستقبلة، وبالتالي يُولّد إشارة نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET). تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع تركيز البروتين المفسفر في العينة، مما يوفر وسيلة لتقييم حالة فسفرة البروتين دون الحاجة إلى غسل العينة.
بروتوكول فحص ثنائي الألواح لـ Phospho-CDK2 (Tyr15)
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن فوسفو-CDK2 (Tyr15) بتقنية HTRF. يُمكّن هذا البروتوكول من مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.
بروتوكول فحص أحادي اللوحة لـ Phospho-CDK2 (Tyr15)
يمكن الكشف عن CDK2 المفسفر (Tyr15) باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يُمكّن هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية من تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
توافق محلول التحلل - محلول التحلل 2، محلول التحلل 3، محلول التحلل 4، محلول التحلل 5
التعديل الجزيئي - الفسفرة
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأورام والالتهابات
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924