مجموعة Revvity، 64HSP70TPEG، HTRF للكشف عن بروتين HSP70-1A/1B الكلي في الإنسان والفأر، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ كلٌّ من HSP70-1A وHSP70-1B، المعروفان أيضًا باسم HSPA1A وHSPA1B، من أهم بروتينات الصدمة الحرارية التي يتم تحفيزها استجابةً للإجهاد، ويبلغ وزنها الجزيئي 70 كيلو دالتون. وتلعب هذه البروتينات المرافقة الجزيئية المحفوظة للغاية دورًا حاسمًا في الحفاظ على جودة البروتين وتوازن الخلية في ظل ظروف الإجهاد، مثل الصدمة الحرارية، والإجهاد التأكسدي، والتعرض للمعادن الثقيلة، أو الأدوية السامة للبروتينات.
تُعدّ بروتينات HSP70-1A/1B من البروتينات القوية المضادة للاستماتة، مما يجعلها ضرورية لنمو الخلايا السرطانية وبقائها. ويُلاحظ ارتفاع مستويات التعبير عن هذه البروتينات في أنواع مختلفة من السرطان، ويرتبط ذلك بتشخيص سيئ، وتكرار الإصابة، ومقاومة العلاج. وبالتالي، يُمثل استهداف بروتينات HSP70-1A/1B استراتيجية واعدة لزيادة حساسية الأورام للعلاج.
في المقابل، ثبت أن بروتينات الصدمة الحرارية 70-1A/1B تحمي الدماغ من مجموعة من إصابات الجهاز العصبي عن طريق تثبيط موت الخلايا والاستجابات المناعية. ونتيجة لذلك، يجري استكشاف المركبات الدوائية القادرة على تحفيز إنتاج بروتينات الصدمة الحرارية 70 كعلاجات محتملة للأمراض العصبية.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص HSP70-1A/1B الكلي
يقيس اختبار HSP70-1A/1B الكلي مستويات بروتين HSP70-1A/1B في الخلايا. وعلى عكس اختبار Western Blot، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام الكهربائي أو الفصل الكهربائي أو نقل البروتين. ويستخدم نوعين من الأجسام المضادة: أحدهما موسوم بصبغة فلورية مانحة، والآخر بصبغة مستقبلة. يتميز كلا الجسمين المضادين بدرجة عالية من التخصص تجاه مواقع محددة على البروتين المستهدف.
في وجود بروتين HSP70-1A/1B، يتشكل معقد مناعي يضم كلا الجسمين المضادين الموسومين، مما يُقرّب الفلوروفور المانح من المستقبل. يُولّد هذا التفاعل إشارة نقل طاقة رنين فلوري (FRET)، تتناسب شدتها طرديًا مع تركيز البروتين الكلي في العينة. كما يُتيح هذا التحليل تقييم حالة فسفرة البروتين، كل ذلك ضمن صيغة تحليل لا تتطلب غسلًا.

بروتوكول فحص HSP70-1A/1B الكلي ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن بروتين الصدمة الحرارية الكلية HSP70-1A/1B بتقنية HTRF. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.

بروتوكول فحص HSP70-1A/1B الكلي في لوحة واحدة
يمكن الكشف عن إجمالي بروتين HSP70-1A/1B باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يسمح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) بتصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
توافق محلول التحلل - محلول التحلل 1
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
Target-HSP70 1A/1B
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي - أورام الجهاز العصبي المركزي
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل