مجموعة Revvity، 64NACPEH، HTRF للكشف عن إجمالي ACC البشري والفأري، 10000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ إنزيم أسيتيل-CoA كاربوكسيلاز (ACC) مُنظِّمًا هامًا لعملية استقلاب الأحماض الدهنية. وبفضل قدرته على تحفيز عملية الكربوكسيل لأسيتيل-CoA إلى مالونيل-CoA، يُمكن اعتبار ACC مؤشرًا حيويًا جديدًا أو هدفًا دوائيًا في أبحاث داء السكري والسمنة. ويتم تثبيط النشاط الإنزيمي لـ ACC عن طريق الفسفرة على بقايا سيرين-79.
كما هو الحال مع العديد من الجينات المشاركة في تنظيم الأحماض الدهنية، تخضع عملية نسخ جينات ACC لتنظيم دقيق بواسطة عامل النسخ SREBP1c. عند تنشيطه، يرتبط هذا العامل بتسلسل الحمض النووي SRE الموجود في المنطقة المجاورة لمُحفِّز جين ACC، مما يُنشِّط عملية نسخه. وبالتالي، يُمثِّل الكشف الكمي عن إجمالي ACC مؤشرًا قيِّمًا لتنشيط مسار SREBP1c.
يقيس اختبار HTRF Total ACC الخلوي مستويات التعبير عن كل من ACC 1 و ACC2، ويمكن استخدامه كاختبار معايرة مع مجموعة HTRF phospho-ACC Ser79. تتوافق هذه المجموعة مع المحاليل المنظمة المستخدمة في مجموعة phospho-ACC، لذا يمكن استخدام نفس المستخلص لتحليل كل من البروتينات المفسفرة والبروتينات الكلية.
يتيح هذا الفحص القائم على الخلايا تحديد كمية ACC 1/2 بشكل بسيط ولكنه حساس وفعال، ويوفر راحة محسنة مقارنة بفحوصات ELISA أو WB.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص إجمالي كربوكسيل الأدينوزين سي (ACC)
يقيس اختبار Total-ACC مستوى التعبير عن إنزيم ACC في مستخلص خلوي. على عكس اختبار Western Blot، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام الكهربائي أو الفصل الكهربائي أو النقل. يستخدم اختبار Total-ACC جسمين مضادين موسومين: أحدهما مرتبط بصبغة فلورية مانحة، والآخر بصبغة مستقبلة. يتميز كلا الجسمين المضادين بتخصص عالٍ تجاه جزء محدد من البروتين. في وجود إنزيم ACC في مستخلص خلوي، يؤدي إضافة هذه المركبات إلى تقريب الصبغة الفلورية المانحة من الصبغة المستقبلة، مما يُولد إشارة FRET. تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع تركيز البروتين الموجود في العينة، مما يوفر وسيلة لتقييم التعبير عن البروتين دون الحاجة إلى غسل العينة.

بروتوكول فحص Total-ACC ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن إجمالي ACC HTRF. يُمكّن هذا البروتوكول من مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.

بروتوكول فحص Total-ACC أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن إجمالي ACC باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يُمكّن هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) من تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
توافق محلول التحلل - محلول التحلل 4 - محلول التحلل 5
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: الأيض/السكري، التهاب الكبد الدهني غير الكحولي/التليف
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل