Product Description
ملخص
تم تصميم اختبار Total PINK1 لمراقبة المستوى الخلوي لبروتين PINK1.
يُعدّ PINK1 كيناز سيرين/ثريونين يلعب دورًا محوريًا في عملية الالتهام الذاتي للميتوكوندريا بوساطة PINK1-Parkin. يُعدّ مسار الإشارات هذا ضروريًا لإزالة نواتج الميتوكوندريا السامة والحفاظ على التوازن الخلوي. ويرتبط خلل تنظيم هذه الإشارات بأمراض التنكس العصبي، ولا سيما مرض باركنسون.
في الميتوكوندريا المتضررة والمستقطبة، يتراكم بروتين PINK1 على الغشاء الخارجي للميتوكوندريا، وينشط مسار PINK1-Parkin عن طريق فسفرة ركيزتين: نطاق اليوبيكويتين الشبيه ببروتين Parkin، وسلاسل اليوبيكويتين عند الموقع Ser65. يُعد Parkin إنزيم يوبيكويتين ليغاز E3، حيث يربط اليوبيكويتين ببروتينات الميتوكوندريا المتضررة، مما يؤدي إلى تحلل العضية. تعمل وظائف اليوبيكويتين المُضخمة المعتمدة على PINK1/Parkin كإشارة لعزل الميتوكوندريا المتضررة وتحللها (الالتهام الذاتي للميتوكوندريا).
يؤدي إزالة استقطاب الميتوكوندريا بواسطة عوامل الفصل، مثل CCCP و valinomycin، إلى تراكم PINK1 على الغشاء الخارجي للميتوكوندريا وتحفيز إنتاج PhosphoS65-Ubiquitin.
كيف يعمل؟
مبدأ فحص البروتين الوردي الكلي 1
يقيس اختبار HTRF Total PINK1 مستوى التعبير عن بروتين PINK1 في مستخلص خلوي. على عكس اختبار Western Blot، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام الكهربائي أو الفصل الكهربائي أو النقل. يستخدم اختبار Total PINK1 جسمين مضادين موسومين، أحدهما مرتبط بصبغة فلورية مانحة، والآخر بصبغة مستقبلة. يتميز كلا الجسمين المضادين بتخصص عالٍ تجاه جزء محدد من البروتين. في وجود بروتين PINK1 في مستخلص خلوي، يؤدي إضافة هذين المركبين إلى تقريب الصبغة الفلورية المانحة من الصبغة المستقبلة، مما يُولد إشارة FRET. تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع تركيز البروتين الموجود في العينة، مما يوفر وسيلة لتقييم التعبير عن البروتين دون الحاجة إلى غسل العينة.
بروتوكول فحص PINK1 الكلي ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن بروتين PINK1 الكلي بتقنية HTRF. يُمكّن هذا البروتوكول من مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.
بروتوكول فحص PINK1 الكلي في لوحة واحدة
يمكن الكشف عن إجمالي بروتين PINK1 باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يُمكّن هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) من تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
توافق محلول التحلل - محلول التحلل 1 محلول التحلل 4
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تقنية TR-FRET
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924