مجموعة Revvity، 64SKP2TPEG، HTRF للكشف عن إجمالي بروتين SKP2 البشري، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ البروتين المرتبط بكيناز طور S رقم 2 (SKP2)، المعروف أيضًا باسم FBXL1، عضوًا بارزًا في عائلة بروتينات F-box. يعمل هذا البروتين كإنزيم E3 ليغاز، وذلك بشكل أساسي من خلال تكوين مُركّب SCF-SKP2. يشتهر SKP2 بقدرته على تنظيم دورة الخلية، حيث يُمكنه إضافة اليوبيكويتين إلى مُنظِّمات دورة الخلية المختلفة وتحفيز تحلّلها، بما في ذلك مثبطات كينازات دورة الخلية p21 وp27 وp57، بالإضافة إلى بروتين دورة الخلية E (سيكلين E) ومُنظِّم دورة الخلية c-Myc. وباعتباره مُحفِّزًا لتكوّن الأورام ومقاومة الأدوية، يُشكّل SKP2 هدفًا جذابًا لمثبطات الجزيئات الصغيرة واستراتيجيات تحلّل البروتين التي تهدف إلى استعادة نقاط التفتيش في دورة الخلية.
توفر فحوصات HTRF العديد من المزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى:

تنسيق متجانس للإضافة والقراءة
لا توجد خطوات غسيل
خلفية منخفضة
تصغير مباشر من صفائح دقيقة ذات 96 أو 384 بئراً إلى تنسيقات فحص عالية الكثافة مثل صفائح 384 بئراً ذات حجم منخفض وصفائح 1536 بئراً
إشارة مستقرة، مما يوفر مرونة في وقت القراءة أو حجم التحليلات
كيف يعمل؟
مبدأ فحص SKP2 الكلي
يقيس اختبار SKP2 الكلي مستويات SKP2 في الخلايا. وعلى عكس اختبار Western Blot، يعتمد هذا الاختبار كليًا على الألواح ولا يتطلب استخدام الهلام الكهربائي أو الرحلان الكهربائي أو النقل. يستخدم الاختبار نوعين من الأجسام المضادة، أحدهما موسوم بصبغة فلورية مانحة والآخر بصبغة مستقبلة. يتميز كلا الجسمين المضادين بدرجة عالية من التخصص تجاه جزء محدد من البروتين.
في وجود SKP2، يُتيح ذلك تكوين مُركّب مناعي يضمّ الأجسام المضادة المُوسومة، مما يُقرّب الفلوروفور المُعطي من المُستقبِل، وبالتالي يُولّد إشارة نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET). تتناسب شدة هذه الإشارة طرديًا مع تركيز البروتين الكلي الموجود في العينة، وتُوفّر وسيلة لتقييم حالة فسفرة البروتين في اختبار لا يتطلّب غسلًا.

بروتوكول فحص SKP2 الكلي ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الطبقتين زراعة الخلايا في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة كشف ذات حجم منخفض و384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف عن بروتين SKP2 الكلي بتقنية HTRF. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها.

بروتوكول فحص SKP2 الكلي في لوحة واحدة
يمكن الكشف عن إجمالي بروتين SKP2 باستخدام كواشف HTRF في طبق واحد يُستخدم للزراعة والتحفيز والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يسمح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) بتصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة HTRF عالية. التطبيق: إشارات الخلية
براند-HTRF
طريقة الكشف - HTRF
توافق محلول التحلل - محلول التحلل 1، محلول التحلل 2، محلول التحلل 4
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 16 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن باستخدام الثلج الجاف
الهدف-SKP2
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تقنية TR-FRET
المجال العلاجي: علم المناعة والأورام
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل