Product Description
ملخص
تمثل ثنائيات IRAK1 المتجانسة حالة إشارات نشطة تتشكل أثناء تنشيط مسار TLR/IL-1R، وتساهم في تضخيم الإشارة. بعد الفسفرة بوساطة IRAK4، تخضع جزيئات IRAK1 لفسفرة ذاتية متبادلة، وتشكل معقدات ثنائية ذات نشاط كينازي مُعزز. يُظهر الشكل الثنائي كفاءة تحفيزية مُحسّنة وقدرة مُعززة على استقطاب TRAF6، مما يُضخم الإشارة الالتهابية. يُساهم فرط نشاط ثنائي IRAK1 في الالتهاب المفرط في أمراض المناعة الذاتية، ويدعم الإشارات السرطانية في سرطانات MYD88 الطافرة. يُمثل سطح التفاعل بين الوحدتين هدفًا علاجيًا محتملاً لتثبيط IRAK1 بشكل انتقائي.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human IRAK1 Dimer اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن ثنائي IRAK1 في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:
تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:
مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:
فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ فحص الكشف عن ثنائيات/تجمعات البروتين AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار AlphaLISA SureFire Ultra dimer/aggregate مستويات بروتين معين في شكل ثنائي أو متعدد الوحدات أو أي شكل متجمع آخر.
يستخدم هذا الفحص نسخة واحدة من الأجسام المضادة مُوسومة بببتيد CaptSure™ والبيوتين، والتي تتعرف على الحواتم المكشوفة على البروتين المستهدف متعدد التكافؤ. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. تُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure خاص لتثبيت الجسم المضاد المُوسوم بعلامة CaptSure بشكلٍ خاص. أما خرز المانح، فتُغطى بالستربتافيدين لالتقاط نفس الجسم المضاد المحدد، والمُوسوم بالبيوتين. في وجود البروتين متعدد التكافؤ، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين متعدد الوحدات الموجود في العينة.
بروتوكول فحص ثنائي الألواح للكشف عن ثنائي الوحدات/التجمعات باستخدام AlphaLISA SureFire Ultra
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة Optiplate ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف AlphaLISA SureFire Ultra للكشف عن ثنائيات أو تجمعات الخلايا. يتيح هذا البروتوكول مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.
بروتوكول فحص AlphaLISA SureFire Ultra للكشف عن ثنائيات/تجمعات البروتين في لوحة واحدة
يمكن الكشف عن ثنائي الوحدات أو التجمعات باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في طبق واحد يُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينات مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra العالية.
حساسية الفحص
حساسية الفحص - تخفيف مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص الخلايا من خلايا كارباس 299 بتركيز 2 × 10⁶ خلية/مل، وحُفزت باستخدام 10 نانوغرام/مل من إنترلوكين-1 بيتا لمدة 10 دقائق في محلول هانكس المتوازن للأملاح مع 0.1% من ألبومين المصل البقري. ثم حُللت الخلايا بإضافة محلول التحلل 5X لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع التحريك.
تم تخفيف المستخلص الخلوي بشكل متسلسل في محلول التحلل، وقُيِّمت مستويات ثنائي IRAK1 باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من المستخلص الخلوي إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا لكل نقطة بيانات. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يمكن للتحليل الكشف عن ثنائي IRAK1 حتى 500 خلية/نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-IRAK1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الالتهاب
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924