مجموعة الكشف عن بروتين CSF1R الفأري الفوسفوري (Tyr697) من Revvity، ALSU-PCSF1R-F-HV، AlphaLISA، 100 نقطة اختبار

ملخص
مستقبل عامل تحفيز المستعمرات 1 (CSF1R) هو مستقبل كيناز التيروزين الذي يرتبط بـ CSF1 وIL-34 لتنظيم بقاء وتكاثر وتمايز الخلايا البلعمية أحادية النواة. عند ارتباطه بالرابط، يخضع CSF1R لعملية التضاعف الذاتي والفسفرة الذاتية، مما يُنشط مسارات PI3K/AKT وMAPK وJAK/STAT. يُعد CSF1R ضروريًا لاستتباب الخلايا البلعمية في الأنسجة، وإعادة تشكيل العظام، والاستجابات المناعية. في البيئة الدقيقة للورم، تُعزز إشارات CSF1R الخلايا البلعمية المرتبطة بالورم والتي تدعم تطور السرطان من خلال كبت المناعة والانتشار. ترتبط طفرات فقدان الوظيفة في CSF1R باعتلال بيضاء الدماغ الذي يظهر في مرحلة البلوغ واضطرابات تنكسية عصبية أخرى، مما يُبرز دوره الحاسم في الحفاظ على الخلايا الدبقية الصغيرة وصحة الدماغ. يجري تطوير مثبطات CSF1R كعلاجات مناعية للسرطان وعلاجات للأمراض التي تسببها الخلايا البلعمية.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Mouse Phospho-CSF1R (Tyr697) اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن phospho-CSF1R (Tyr697) في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.
يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُؤَشَّر بالبيوتين. في وجود البروتين المُفسفر، يُقرِّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المُفسفر الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس عدة أهداف.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم الجهاز مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
حساسية الفحص
حساسية الفحص - تخفيف مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص الخلية من خلايا RAW 264.7 التي تمت زراعتها حتى وصلت إلى مرحلة التكاثر الكامل في قارورة T175، وتم معالجتها بـ 100 نانوغرام/مل من M-CSF البشري لمدة 5 دقائق وتم تحليلها في 4 مل من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج.
تم تخفيف مستخلص الخلايا بشكل متسلسل في محلول التحلل، وقُيِّمت مستويات CSF1R p-(Tyr697) باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلايا إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا لكل نقطة بيانات. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يستطيع هذا التحليل الكشف عن تعبير CSF1R p-Tyr697 في أقل من 1000 خلية/نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 30 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-CSF1R
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
النوع المستهدف - الفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأورام العصبي
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل