مجموعة الكشف عن الفوسفو-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) البشرية والفأرية من Revvity، ALSU-PERK-A10K، AlphaLISA SureFire Ultra، 10000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ كلٌّ من ERK1/2 (كينازات تنظيم الإشارات خارج الخلية 1 و2)، المعروفان أيضًا باسم MAPK3 وMAPK1 على التوالي، عنصرين أساسيين في مسار إشارات MAPK/ERK في كلٍّ من الإنسان والفأر. وتلعب هذه الكينازات أدوارًا محورية في العديد من العمليات الخلوية، بما في ذلك تكاثر الخلايا وتمايزها وبقائها وهجرتها. ويحدث تنشيط ERK1/2 من خلال فسفرة مزدوجة عند بقايا ثريونين وتيروسين محددة (Thr202/Tyr204 لـ ERK1 البشري؛ Thr185/Tyr187 لـ ERK2 البشري)، وهو أمر ضروري لنشاطها الكينازي وتنظيمها اللاحق للأهداف النهائية. غالبًا ما يُصاب مسار MAPK/ERK باضطراب في العديد من الحالات المرضية، لا سيما في السرطان واضطرابات النمو والأمراض التنكسية العصبية. ويمكن أن يُسهم التنشيط غير الطبيعي لـ ERK1/2 في تكاثر الخلايا غير المنضبط، ومقاومة الاستماتة الخلوية، وتعزيز بقاء الخلايا، وهو ما يرتبط غالبًا بتطور الأورام ومقاومة العلاج. وعلى العكس من ذلك، فإن عدم كفاية تنشيط ERK1/2 يمكن أن يؤدي إلى تشوهات في النمو وضعف الاستجابات الخلوية لعوامل النمو والمحفزات الأخرى.
مجموعة الكشف AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Phospho-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) هي عبارة عن فحص مناعي ساندوتش مصمم للكشف الكمي عن ERK1/2 المفسفر في مستخلصات الخلايا من عينات بشرية وفئران باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات ألفا شورفاير للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.
يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُؤَشَّر بالبيوتين. في وجود البروتين المُفسفر، يُقرِّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المُفسفر الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس عدة أهداف.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم الجهاز مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
المسار الخلوي أو مسار الإشارات - MAPK
طريقة الكشف - ألفا
توافق محلول التحلل - محلول التحلل
التعديل الجزيئي - الفسفرة
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-ERK1/2
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: أمراض القلب والأوعية الدموية، الجهاز العصبي المركزي، الالتهاب العصبي
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل