Product Description
ملخص
يُعدّ عامل النسخ FOXO1 (Forkhead Box O1) مُنظِّمًا للجينات المُشاركة في استقلاب الجلوكوز، وتوقيف دورة الخلية، والاستماتة الخلوية، ومقاومة الإجهاد التأكسدي. يتم التحكم في نشاط FOXO1 عن طريق الفسفرة بوساطة AKT، مما يُعزز استبعاده من النواة وتحلله بواسطة البروتيازوم. ينتقل FOXO1 غير المُفسفر إلى النواة ويُفعِّل الجينات المُستهدفة، بما في ذلك جلوكوز-6-فوسفاتاز، وPEPCK، وp27Kip1. يلعب FOXO1 أدوارًا حاسمة في استحداث الجلوكوز في الكبد، ويعمل كمثبط للأورام في السرطان. يرتبط خلل تنظيم FOXO1 بداء السكري من النوع الثاني والسرطان، مما يجعله هدفًا علاجيًا للاضطرابات الأيضية والأورام الخبيثة.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Phospho-FOXO1 (Ser256) اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن phospho-FOXO1 (Ser256) في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:
تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:
مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:
فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار فوسفو-ألفا ليسا شورفاير ألترا
يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.
يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُؤَشَّر بالبيوتين. في وجود البروتين المُفسفر، يُقرِّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المُفسفر الموجودة في العينة.
بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس عدة أهداف.
بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم الجهاز مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
حساسية الفحص
حساسية الفحص - مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص الخلية من خلايا HEK293 التي تمت زراعتها حتى وصلت إلى مرحلة التكاثر الكامل في قارورة T175 وتم تحليلها في 3 مل من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج.
تم تخفيف المستخلص الخلوي بشكل متسلسل في محلول التحلل، ثم تم قياس مستويات الفسفرة (Ser256) ومستويات FOXO1 الكلية باستخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra المناسبة. في خطوة الكشف، تم نقل 10 ميكرولتر من المستخلص الخلوي إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئراً، ثم أضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. تم قراءة الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا/نقطة البيانات على الرسم البياني. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يستطيع هذا التحليل الكشف عن الفوسفور (Ser256) في حوالي 2500 خلية/نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-FOXO1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأعصاب الأيضي والأورام
حجم الوحدة: 50,000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924