Product Description
ملخص
الباكسيلين بروتين مُحَوِّل للالتصاقات البؤرية، يعمل كمنصة داعمة لدمج الإشارات من الإنتغرينات ومستقبلات عوامل النمو ومكونات الهيكل الخلوي. يتمركز في الالتصاقات البؤرية حيث يُنسق التصاق الخلايا وهجرتها وبقائها من خلال تفاعلاته مع الكينازات (FAK، Src) والبروتينات البنيوية (فينكولين، تالين) وجزيئات الإشارة (Crk، p120RasGAP). يخضع الباكسيلين للفسفرة عند بقايا التيروسين والسيرين المتعددة استجابةً لإشارات الالتصاق والنمو، مما يُعدِّل تفاعلاته البروتينية والإشارات اللاحقة. يلعب أدوارًا حاسمة في تنظيم الهيكل الخلوي وانتشار الخلايا وهجرتها الموجهة. يرتبط التعبير غير الطبيعي عن الباكسيلين وفسفرته بتطور السرطان وغزوه وانتشاره عبر أنواع متعددة من الأورام. يُمثل استهداف مسارات الإشارة التي يتوسطها الباكسيلين استراتيجية محتملة لتثبيط حركة الخلايا السرطانية وانتشارها النقيلي.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Phospho-Paxillin (Tyr118) اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن phospho-Paxillin (Tyr118) في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:
تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:
مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:
فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.
يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُؤَشَّر بالبيوتين. في وجود البروتين المُفسفر، يُقرِّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المُفسفر الموجودة في العينة.
بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس عدة أهداف.
بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم الجهاز مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
مستويات الباكسيلين الفوسفوري القاعدي (Tyr118) في مختلف أنواع الخلايا
تم زرع الخلايا الملتصقة بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 200 ميكرولتر من محلول التحليل.
زُرعت الخلايا المعلقة بمعدل 400,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئرًا في محلول HBSS مضافًا إليه 0.1% من ألبومين المصل البقري (BSA). ثم رُسِّبت الخلايا بالطرد المركزي وحُلِّلت باستخدام 200 ميكرولتر من محلول التحلل. قُيِّمت مستويات الباكسيلين الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلايا (حوالي 2,000 خلية ملتصقة أو 20,000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
كما هو متوقع، لوحظت مستويات عالية من الفوسفور القاعدي (Tyr118) باكسيلين في خلايا A431 و C2C12 بينما تم الكشف عن مستويات منخفضة في خلايا RT4 و HUVEC.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-باكسيلين
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: أورام الكبد الدهني غير الكحولي/التليف
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924