مجموعة الكشف عن بروتين STAT5 الفوسفوري البشري والفأري (Tyr694/699) من Revvity، ALSU-PST5-B50K، AlphaLISA، 50000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ STAT5 (محوّل الإشارة ومنشط النسخ 5) عامل نسخ أساسي في مسار إشارات JAK/STAT، ويلعب دورًا حيويًا في العمليات الخلوية البشرية. يتواجد STAT5 في شكلين متماثلين وثيقي الصلة، هما STAT5A وSTAT5B، واللذان يشاركان في وظائف فيزيولوجية متنوعة، بما في ذلك تكاثر الخلايا وتمايزها وبقائها، لا سيما في الخلايا المكونة للدم والخلايا المناعية. يتم تنشيط STAT5 من خلال الفسفرة عند بقايا التيروسين الرئيسية، Tyr694 لـ STAT5A وTyr699 لـ STAT5B. هذه الفسفرة ضرورية لتكوين ثنائي STAT5، وانتقاله إلى النواة، ونشاطه النسخي اللاحق. غالبًا ما يكون مسار إشارات STAT5 مضطربًا في العديد من الحالات المرضية، لا سيما في الأورام الدموية الخبيثة والأورام الصلبة واضطرابات المناعة. يساهم التنشيط غير الطبيعي لمسار STAT5 في تطور السرطان، ومقاومة العلاج، واختلال وظائف المناعة. لوحظت مستويات مرتفعة من STAT5 المفسفر (Tyr694/699) في العديد من أنواع السرطان، وخاصة في سرطان الدم والأورام اللمفاوية، وغالبًا ما ترتبط بتشخيص سيئ ومرض عدواني.
مجموعة الكشف AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Phospho-STAT5 (Tyr694/699) هي عبارة عن فحص مناعي ساندوتش مصمم للكشف الكمي عن STAT5 المفسفر (Tyr694/699) في مستخلصات الخلايا البشرية باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات ألفا شورفاير للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.

يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُؤَشَّر بالبيوتين. في وجود البروتين المُفسفر، يُقرِّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المُفسفر الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس عدة أهداف.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم الجهاز مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
المسار الخلوي أو مسار الإشارات - JAK/STAT
طريقة الكشف - ألفا
توافق محلول التحلل - محلول التحلل
التعديل الجزيئي - الفسفرة
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-STAT5
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
حجم الوحدة - 50000 نقطة تحليل