مجموعة الكشف عن ARID1B الكلية البشرية والفأرية من Revvity، ALSU-TARIDB-A500، AlphaLISA، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ نطاق التفاعل الغني بالأدينين والثايمين 1ب (ARID1B) بروتينًا مُعدِّلًا للكروماتين ووحدةً فرعيةً أساسيةً في مُركَّب SWI/SNF، حيث يُنظِّم التعبير الجيني من خلال إعادة تموضع النيوكليوسومات المعتمدة على الأدينين ثلاثي الفوسفات (ATP). ويكتسب ARID1B أهميةً خاصةً في التطور العصبي، إذ يُنظِّم تمايز الخلايا العصبية، ووظيفة المشابك العصبية، وتكوين الدماغ. ويؤدي نقص أحد أليلي ARID1B إلى متلازمة كوفين-سيريس، التي تتميز بالإعاقة الذهنية وتأخر النمو. كما تُوجد طفرات في ARID1B في أنواعٍ مختلفةٍ من السرطانات، بما في ذلك الورم الأرومي العصبي وسرطان الثدي، حيث يُساهم فقدان وظيفته في تطور الورم. ونظرًا لوظيفة ARID1B كمثبطٍ للأورام، فإنه يُصبح هدفًا هامًا لتطوير العلاجات فوق الجينية.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total ARID1B اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي ARID1B في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن ARID1B في مختلف أنواع الخلايا
تم تقييم التعبير عن ARID1B في خطوط خلوية مختلفة باستخدام مجموعة اختبار AlphaLISA SureFire Ultra.
في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من المستخلص الخلوي (حوالي 5000 خلية ملتصقة و8000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئراً، ثم أُضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
تم التعبير عن ARID1B بمستويات عالية في جميع سلالات الخلايا المختبرة. وتم الكشف عن مستويات مماثلة من بروتين ARID1B في سلالات خلايا HEK293T (ARID1A-KO) وسلالات خلايا HEK293T من النوع البري.
حساسية الفحص
حساسية اختبار ARID1B الكلية - تخفيف مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص الخلايا من خلايا HCT-116 التي تمت زراعتها حتى وصلت إلى مرحلة التكاثر الكامل في قوارير T175 وتم تحليلها في 16 مل من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج.
تم تخفيف مستخلص الخلايا بشكل متسلسل في محلول التحلل، وقُيِّمت مستويات ARID1B باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلايا إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا لكل نقطة بيانات. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يمكن لهذا التحليل الكشف عن تعبير ARID1B في أقل من 100 خلية/نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف ARID1B
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - علم الأورام
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل