مجموعة الكشف عن بروتين BAX الكلي للفئران من Revvity، ALSU-TBAX-B-HV، AlphaLISA، 100 نقطة اختبار

ملخص
بروتين BAX (البروتين المرتبط بـ BCL-2) هو عضو محفز للموت الخلوي المبرمج من عائلة BCL-2، يعمل على زيادة نفاذية الغشاء الخارجي للميتوكوندريا لبدء مسار الموت الخلوي المبرمج الداخلي. عند تحفيز الموت الخلوي المبرمج، تُفعّل بروتينات BH3 فقط بروتين BAX، مما يؤدي إلى انتقاله إلى الميتوكوندريا، وتكوين تجمعات بروتينية، وتكوين مسام. تُطلق تجمعات BAX السيتوكروم c وعوامل أخرى محفزة للموت الخلوي المبرمج، والتي بدورها تُفعّل الكاسبيزات وتُسبب موت الخلية. يُساهم فقدان وظيفة BAX في تطور السرطان، ومقاومة العلاج الكيميائي، وأمراض المناعة الذاتية من خلال ضعف استجابات الموت الخلوي المبرمج. تهدف الاستراتيجيات العلاجية إلى استعادة الموت الخلوي المبرمج بوساطة BAX من خلال مُحاكيات BH3 أو مُنشطات BAX المباشرة.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Mouse Total BAX اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي BAX في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
تنوع التحليل - لوحة الخلايا
تم زرع الخلايا بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحليل.
زُرعت الخلايا المعلقة بمعدل 400,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئرًا في محلول HBSS مضافًا إليه 0.1% من ألبومين المصل البقري (BSA). ثم رُسِّبت الخلايا بالطرد المركزي وحُلِّلت باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل. خُفِّفت مُستخلصات الخلايا لاحقًا في محلول التحلل. قُيِّمت مستويات Bax الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مُستخلص الخلية (ما يُعادل تقريبًا 1000 خلية مُلتصقة أو 5000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المُستقبِل وحُضِّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. أخيرًا، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المُعطي إلى كل بئر وحُضِّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
تم الكشف عن تعبير Bax في العديد من سلالات الخلايا الملتصقة والمعلقة للفئران.
حساسية الفحص
حساسية الفحص - تخفيف مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص الخلايا من خلايا C2C12 التي تمت زراعتها حتى وصلت إلى مرحلة التكاثر الكامل في قارورة T175 وتم تحليلها في 16 مل من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج.
تم تخفيف المستخلص الخلوي بشكل متسلسل في محلول التحلل، وقُيِّمت مستويات Bax الكلية باستخدام جهاز AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من المستخلص الخلوي إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا لكل نقطة بيانات. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يمكن للتحليل الكشف عن بروتين Bax الكلي حتى 100 خلية/نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 30 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
صندوق الهدف
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
النوع المستهدف - الفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأورام العصبي
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل