مجموعة الكشف عن بروتين CHOP الكلي في الإنسان والفأر من شركة Revvity، طراز ALSU-TCHOP-A50K، AlphaLISA، تحتوي على 50,000 نقطة اختبار.

ملخص
بروتين CHOP (البروتين المتماثل لـ C/EBP)، المعروف أيضًا باسم DDIT3، هو عامل نسخ يُحفز بفعل الإجهاد، وينشط بشكل أساسي أثناء إجهاد الشبكة الإندوبلازمية. ويتم تنشيطه بشكل رئيسي من خلال استجابة البروتين غير المطوي (UPR)، لا سيما في مسار إشارات PERK–eIF2α–ATF4. يعزز CHOP موت الخلايا المبرمج عندما يكون إجهاد الشبكة الإندوبلازمية شديدًا أو مطولًا، وذلك عن طريق زيادة تنظيم الجينات المحفزة للموت المبرمج، وكبح عوامل مقاومة الموت المبرمج مثل BCL2، وتعديل مسارات الإجهاد التأكسدي. ويرتبط ارتفاع مستوى تعبير CHOP بالعديد من الأمراض، بما في ذلك التنكس العصبي، واضطرابات التمثيل الغذائي، والسرطان. وفي الأورام، يمكن لـ CHOP أن يثبط أو يعزز تكوين الأورام اعتمادًا على السياق، مما يجعله هدفًا دقيقًا للتدخل العلاجي.
مجموعة الكشف عن CHOP الكلي في الإنسان والفأر AlphaLISA SureFire Ultra هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن CHOP الكلي في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن CHOP في خطوط الخلايا المختلفة
تم زرع الخلايا الملتصقة بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحليل.
تم زرع الخلايا المعلقة بمعدل 400000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في محلول HBSS + 0.1% BSA، وتم طرد الخلايا وتحليلها باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل.
تم تقييم مستويات CHOP الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية ملتصقة أو 40000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
لوحظ ارتفاع مستوى التعبير عن CHOP في خلايا THP-1 و Caco-2 و NIH/3T3.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مجموعة المنتجات - طقم
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
تارجت-تشوب
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: الأيض/السكري، علم الأعصاب، الأورام
حجم الوحدة - 50000 نقطة تحليل