مجموعة الكشف عن بروتين FOXO3A الكلي البشري والفأري من Revvity، ALSU-TFOXO3-A10K، AlphaLISA، 10000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ عامل النسخ FOXO3A (Forkhead Box O3A) عامل نسخ يُنظّم الجينات المُشاركة في موت الخلايا المبرمج، وتوقف دورة الخلية، وإصلاح الحمض النووي، ومقاومة الإجهاد. يتم التحكم بنشاط FOXO3A بشكل أساسي عن طريق الفسفرة بوساطة AKT، مما يُعزز عزله في السيتوبلازم وتعطيله. في ظل ظروف الإجهاد أو انخفاض إشارات AKT، ينتقل FOXO3A إلى النواة ويُفعّل الجينات المستهدفة، بما في ذلك p21 وp27Kip1 وBim وGADD45. يعمل FOXO3A كمثبط للأورام من خلال تعزيز موت الخلايا المبرمج ونقاط التفتيش في دورة الخلية استجابةً للإجهاد السرطاني. يُساهم فقدان نشاط FOXO3A من خلال فرط تنشيط AKT في تطور السرطان، ومقاومة العلاج الكيميائي، وإعادة برمجة التمثيل الغذائي. في المقابل، يرتبط تنشيط FOXO3A بطول العمر وتحمّل الإجهاد. تهدف الاستراتيجيات العلاجية إلى استعادة وظيفة FOXO3A من خلال تثبيط AKT أو التنشيط المباشر لـ FOXO3A في علاج السرطان.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total FOXO3A اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي FOXO3A في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن FOXO3A في خطوط الخلايا المختلفة
تم زرع خطوط الخلايا الملتصقة في صفيحة ذات 96 بئراً (40000 خلية/بئر) وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، و5% ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحليل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم زرع خطوط الخلايا المعلقة في صفيحة ذات 96 بئراً (400000 خلية / بئر) وتم تحليلها باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم تقييم مستويات FOXO3A باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية ملتصقة و40000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
يتم التعبير عن بروتين FOXO3A الكلي في مجموعة واسعة من أنواع الخلايا، مع تعبير عالٍ بشكل خاص في HEK293 وRPMI 8226 وخط خلايا الفأر NIH/3T3.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-FOXO3A
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأورام العصبي
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل