مجموعة الكشف عن GSPT1 الكلي البشري والفأري من Revvity، ALSU-TGSPT1-A10K، AlphaLISA، 10000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ عامل الانتقال من طور G1 إلى طور S رقم 1 (GSPT1)، المعروف أيضًا باسم عامل إطلاق حقيقيات النوى 3a (eRF3a)، عاملًا لإنهاء الترجمة يتفاعل مع eRF1 لتنظيم استقرار الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) وتحلله. ويلعب دورًا حاسمًا في تقدم دورة الخلية، وتكاثرها، وإنهاء تخليق البروتين. يحتوي GSPT1 على نطاق GTPase ضروري لنشاطه، ويتفاعل مع عوامل مختلفة، بما في ذلك PABP ومكونات مسار إشارات mTOR. يرتبط خلل تنظيم GSPT1 بالأورام الدموية الخبيثة والأورام الصلبة، مما يؤثر على تكاثر الخلايا، وموتها المبرمج، وانتشارها. يمكن أن يؤدي فرط التعبير عن GSPT1 إلى تعزيز نمو الخلايا وبقائها، مما يساهم في مقاومة الأدوية في بعض أنواع السرطان. وقد برز استهداف GSPT1 من خلال استراتيجيات تحلل البروتين كنهج علاجي واعد في علاج السرطان.
مجموعة الكشف عن إجمالي GSPT1 البشري والفأري AlphaLISA SureFire Ultra هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي GSPT1 في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
مستويات التعبير عن GSPT1 في أنواع مختلفة من الخلايا
زُرعت الخلايا الملتصقة بمعدل 40,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئراً في وسط غذائي كامل، وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. ثم حُللت الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة). أما الخلايا المعلقة، فزُرعت بمعدل 100,000 خلية/بئر (200 ميكرولتر/بئر) في صفيحة زراعة ذات 96 بئراً في محلول HBSS مضاف إليه 0.1% من ألبومين المصل البقري، ثم حُللت باستخدام 50 ميكرولتر من محلول التحلل 5X لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم تقييم مستويات GSPT1 الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (4000 خلية) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُعبر عن GSPT1 بشكل كبير في معظم خطوط الخلايا التي تم اختبارها.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مجموعة المنتجات - طقم
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-GSPT1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - علم الأورام
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل