مجموعة الكشف عن بروتين HSP90 الكلي البشري والفأري من Revvity، ALSU-THSP90-A500، AlphaLISA، 500 نقطة اختبار

ملخص
بروتين الصدمة الحرارية 90 (HSP90) هو بروتين مرافق جزيئي أساسي للطي السليم والاستقرار والوظيفة للعديد من البروتينات المستهدفة، بما في ذلك العديد من البروتينات الورمية وجزيئات الإشارة. يعمل HSP90 من خلال دورة توافقية تعتمد على ATP، بمساعدة بروتينات مرافقة أخرى، لتسهيل نضج البروتين ومنع تكتله. تشمل البروتينات المستهدفة الكينازات (AKT، BRAF)، وعوامل النسخ (p53، HIF-1α)، ومستقبلات الهرمونات (مستقبل الإستروجين، مستقبل الأندروجين). يُعبر عن HSP90 بشكل دائم، ولكنه يزداد تعبيره في ظروف الإجهاد الخلوي. في السرطان، يدعم HSP90 استقرار البروتينات الورمية المتحولة والمفرطة التعبير، مما يجعله هدفًا علاجيًا جذابًا. تعمل مثبطات HSP90، مثل مشتقات جيلداناميسين، على تعطيل مسارات ورمية متعددة في آن واحد، مما يؤدي إلى تحلل البروتينات المستهدفة وموت الخلايا السرطانية، لا سيما في أنواع السرطان التي تعتمد على بروتينات HSP90 المستهدفة.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total HSP90 اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي HSP90 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
تعدد استخدامات اختبار HSP90 الكلي في مختلف أنواع الخلايا
زُرعت الخلايا الملتصقة بمعدل 40,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئراً في وسط غذائي كامل، وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. ثم حُللت الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل. غُسلت الخلايا المعلقة بمحلول هانكس المتوازن للأملاح (HBSS) وحُللت باستخدام محلول التحلل بتركيز 4 × 10⁶ خلية/مل.
تم تخفيف المستخلصات بشكل أكبر قبل التقييم للبقاء ضمن النطاق الخطي للفحص.
تم تقييم مستويات HSP90 الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (500 خلية ملتصقة أو 5000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-HSP90
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأورام العصبي
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل