مجموعة الكشف عن IRE1α الكلي البشري والفأري من Revvity، ALSU-TIRE1-A-HV، AlphaLISA، 100 نقطة اختبار

ملخص
إنزيم IRE1A (الإنزيم 1 ألفا المُتطلب للإينوزيتول) هو بروتين غشائي في الشبكة الإندوبلازمية، يعمل ككيناز وإنزيم نوكلياز داخلي في استجابة البروتين غير المطوي (UPR). عند تعرض الشبكة الإندوبلازمية للإجهاد، يخضع IRE1A لعملية تجميع وتفسفر ذاتي، مما يُنشط نطاقه الريبونوكليازي لربط mRNA الخاص بـ XBP1، مُنتجًا عامل النسخ النشط XBP1s. يُعزز XBP1s التعبير عن البروتينات المُرافقة في الشبكة الإندوبلازمية، وإنزيمات تخليق الدهون، ومكونات التحلل المرتبطة بالشبكة الإندوبلازمية لاستعادة توازنها. كما يُحلل IRE1A جزيئات mRNA الموجودة في الشبكة الإندوبلازمية من خلال عملية التحلل المُنظم المُعتمد على IRE1 (RIDD) لتقليل عبء البروتين في الشبكة الإندوبلازمية. يُساهم التنشيط المُزمن لـ IRE1A في الالتهاب، وموت الخلايا المُبرمج، ونشوء الأمراض في السرطان، والسكري، والاضطرابات التنكسية العصبية. يُمثل تعديل نشاط IRE1A فرصة علاجية للأمراض المُرتبطة بإجهاد الشبكة الإندوبلازمية.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total IRE1α اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي IRE1α في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن IRE1 في مختلف أنواع الخلايا
زُرعت الخلايا الملتصقة بمعدل 40,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئراً في وسط غذائي كامل، وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. ثم حُللت الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل. غُسلت الخلايا المعلقة بمحلول هانكس المتوازن للأملاح (HBSS) وحُللت باستخدام محلول التحلل بتركيز 4 × 10⁶ خلية/مل.
تم تقييم مستويات IRE1 باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (4000 خلية ملتصقة أو 40000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 30 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-IRE1α
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأعصاب الأيضي والأورام
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل