Revvity، ALSU-TIRF5-A50K، AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total IRF5، مجموعة الكشف عن IRF5 البشرية والفأرية، 50000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ عامل تنظيم الإنترفيرون 5 (IRF5) مُنظِّمًا نسخياً للاستجابات المناعية المعتمدة على الإنترفيرون من النوع الأول (IFN-α وIFN-β). يلعب هذا العامل النسخي دورًا محوريًا في الاستجابة المناعية الفطرية ضد فيروسات الحمض النووي DNA وRNA. يتواجد IRF5 في سيتوبلازم الخلايا غير المصابة بصورة غير نشطة. يمكن لبعض الوسائط في المسارات التي تلي العدوى الفيروسية أن تُفرط في التعبير عن IRF5 وتُفسفره. يرتبط IRF5 بأنواع مختلفة من السرطانات وأمراض المناعة الذاتية.
مجموعة الكشف عن إجمالي IRF5 البشري والفأري AlphaLISA SureFire Ultra هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي IRF5 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات ألفا شورفاير لـ

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
تقييم التعبير الكلي لـ IRF5 في خلايا الدم أحادية النواة الطرفية
تم عزل الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMCs) من متبرعين أصحاء باستخدام Ficoll® Plaque Plus (Merck GE17-1440-02).
زُرعت الخلايا في صفيحة ذات 96 بئرًا (400,000 خلية/بئر) وحُللت في 100 ميكرولتر من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة). ثم خُفف المحلول الناتج بشكل متسلسل في محلول التحلل وقُيّم باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Total IRF5. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من محلول الخلايا (بدءًا من حوالي 40,000 خلية) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. أخيرًا، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية. يُشار إلى عدد الخلايا/نقطة البيانات على الرسم البياني.

التعبير التفاضلي لـ IRF5 Total في مختلف سلالات الخلايا
تم تخفيف مستخلصات الخلايا البشرية والفأرية باستخدام محلول التحلل. يوضح الرسم البياني العدد التقريبي للخلايا في كل نقطة بيانات. تم تقييم مستويات IRF5 الكلية باستخدام مجموعة اختبار AlphaLISA SureFira Ultra. في خطوة الكشف، تم نقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يختلف التعبير الكلي لجين IRF5 باختلاف نوع الخلية. وكما هو متوقع، تم رصد مستوى عالٍ جدًا من التعبير في سلالات الخلايا البشرية: THP-1 وKARPAS-299 وU937، وفي سلالات خلايا الفئران: RAW 264.7 وL929.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
توافق محلول التحلل - محلول التحلل
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-IRF5
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: أورام الالتهاب
حجم الوحدة - 50000 نقطة تحليل