Revvity، ALSU-TIRF7-A500، مجموعة الكشف عن IRF7 البشري الكلي AlphaLISA، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ عامل تنظيم الإنترفيرون 7 (IRF7) منظمًا رئيسيًا لاستجابات الإنترفيرون من النوع الأول (IFN)، لا سيما أثناء العدوى الفيروسية. عند تنشيطه بواسطة مستقبلات التعرف على الأنماط (PRRs) مثل TLR7 وTLR9 وRIG-I، يخضع IRF7 لعملية فسفرة، وتكوين ثنائيات، وانتقال إلى النواة، حيث يحفز نسخ جينات IFN-α وIFN-β. يلعب IRF7 دورًا محوريًا في المناعة المضادة للفيروسات، إذ يربط بين استشعار المناعة الفطرية وتنشيط الاستجابات المناعية التكيفية. إضافةً إلى العدوى، يرتبط خلل تنظيم نشاط IRF7 بأمراض المناعة الذاتية، بما في ذلك الذئبة الحمامية الجهازية (SLE)، ويساهم في الأمراض المناعية لبعض أنواع السرطان. يُبشّر تعديل نشاط IRF7 بنتائج واعدة في العلاجات المضادة للفيروسات، والعلاج المناعي للسرطان، وإدارة أمراض المناعة الذاتية.
مجموعة الكشف عن إجمالي IRF7 البشري AlphaLISA SureFire Ultra هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي IRF7 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية ألفا.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن IRF7 الكلي في خطوط الخلايا المختلفة
تم زرع خطوط الخلايا الملتصقة في صفيحة ذات 96 بئراً (40000 خلية/بئر) وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، و5% ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل عند درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم زرع خطوط الخلايا المعلقة في صفيحة ذات 96 بئراً (400000 خلية / بئر) في HBSS + 0.1٪ BSA ثم تم تحليلها باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم تقييم مستويات IRF7 باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية ملتصقة و40000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
كما هو متوقع، كان مستوى التعبير عن بروتين IRF7 الكلي منخفضًا في معظم سلالات الخلايا التي تم اختبارها. وتم رصد مستويات تعبير متوسطة في خلايا THP-1 و HT 29.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مجموعة المنتجات - طقم
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-IRF7
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: أورام الالتهاب
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل