مجموعة الكشف عن بروتين MCL-1 الكلي البشري والفأري من شركة Revvity، طراز ALSU-TMCL1-A10K، بتقنية AlphaLISA، تحتوي على 10000 نقطة اختبار.

ملخص
يُعدّ بروتين سرطان الدم النخاعي 1 (MCL-1) بروتينًا مضادًا للاستماتة ينتمي إلى عائلة BCL-2، ويمنع نفاذية الغشاء الخارجي للميتوكوندريا وإطلاق السيتوكروم ج. يتمركز MCL-1 في الغشاء الخارجي للميتوكوندريا حيث يعزل البروتينات المحفزة للاستماتة مثل BAK وBAX وبروتينات BH3 فقط، وبالتالي يمنع بدء عملية الاستماتة. يخضع التعبير عن MCL-1 لتنظيم دقيق على المستويات النسخية وما بعد النسخية وما بعد الترجمية، مع معدل دوران سريع في الظروف الطبيعية. يُلاحظ فرط التعبير عن MCL-1 بشكل متكرر في الأورام الدموية الخبيثة والأورام الصلبة، حيث يُكسبها مقاومة للعلاج الكيميائي والعلاجات الموجهة. يختلف اعتماد أنواع السرطان المختلفة على MCL-1، مما يجعله هدفًا جذابًا للعلاج الانتقائي للسرطان. يجري تطوير محاكيات BH3 ومثبطات خاصة بـ MCL-1 للتغلب على مقاومة الاستماتة في أنواع السرطان المعتمدة على MCL-1.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total MCL-1 اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي MCL-1 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن MCL-1 في مختلف أنواع الخلايا
تم زرع الخلايا الملتصقة بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 200 ميكرولتر من محلول التحليل.
زُرعت الخلايا المعلقة بمعدل 400,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئرًا في محلول HBSS مضافًا إليه 0.1% من ألبومين المصل البقري (BSA). ثم رُسِّبت الخلايا بالطرد المركزي وحُلِّلت باستخدام 200 ميكرولتر من محلول التحلل. قُيِّمت مستويات MCL-1 الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مُستخلص الخلايا (حوالي 2,000 خلية ملتصقة أو 20,000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المُستقبِل وحُضِّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المُعطي إلى كل بئر وحُضِّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُعبر عن بروتين MCL-1 على نطاق واسع في العديد من سلالات الخلايا. وقد لوحظ ارتفاع مستوى التعبير عن MCL-1 في خلايا Raji و EL-4، بينما تم الكشف عن مستويات أقل في خلايا Hep G2 و K-562.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-MCL-1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - علم الأورام
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل