مجموعة الكشف عن MSH3 البشري الكلي من Revvity، ALSU-TMSH3-A-HV، AlphaLISA، 100 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ بروتين MutS Homolog 3 (MSH3) بروتينًا لإصلاح عدم تطابق الحمض النووي، حيث يُشكّل مُركّب MutSβ مع MSH2 للتعرّف على حلقات الإدخال والحذف (IDLs) وإصلاحها، بالإضافة إلى حالات عدم التطابق الأكبر في الحمض النووي. ويُعتبر MSH3 بالغ الأهمية لإصلاح وسائط الانزلاق التي تنشأ أثناء تضاعف الحمض النووي في التسلسلات المتكررة، بما في ذلك التكرارات الميكروية. يبدأ مُركّب MutSβ عملية الإصلاح عن طريق استقطاب MLH1-PMS2 (MutLα) وعوامل أخرى لاحقة لاستئصال وإعادة تركيب سلسلة الحمض النووي التي تحتوي على الخطأ. يؤدي نقص MSH3 إلى عدم استقرار التكرارات الميكروية (MSI) وزيادة معدلات الطفرات، لا سيما في التسلسلات المتكررة. ترتبط طفرات MSH3 ببعض متلازمات السرطان الوراثية، وتُساهم في تكوين الأورام من خلال عدم استقرار الجينوم. في علاج السرطان، يؤثر مستوى MSH3 على الاستجابة للعوامل المُتلفة للحمض النووي والعلاج المناعي، حيث تُظهر أورام MSI غالبًا استجابة مناعية مُعززة.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human Total MSH3 اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي MSH3 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير الداخلي عن MSH3 في مختلف أنواع الخلايا
زُرعت الخلايا الملتصقة بمعدل 40,000 خلية/بئر في صفيحة زراعة ذات 96 بئراً في وسط غذائي كامل، وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. ثم حُللت الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل. غُسلت الخلايا المعلقة بمحلول هانكس المتوازن للأملاح (HBSS) وحُللت باستخدام محلول التحلل بتركيز 4 × 10⁶ خلية/مل.
تم تقييم مستويات MSH3 باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (4000 خلية ملتصقة أو 40000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
تم الكشف عن مستويات داخلية من MSH3 في أنواع مختلفة من الخلايا.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 30 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-MSH3
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: علم الأورام العصبي
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل