مجموعة الكشف عن الميوجينين الكلي البشري والفأري من ريفيتي، ALSU-TMYOG-A10K، ألفا ليسا، 10000 نقطة اختبار

ملخص
الميوجينين (MYOG) هو عامل نسخ خاص بالعضلات ينتمي إلى عائلة MyoD من البروتينات ذات بنية اللولب-الحلقة-اللولب الأساسية، وينظم تمايز العضلات الهيكلية وتجديدها. يُعبَّر عن الميوجينين خلال المرحلة النهائية من تمايز العضلات، حيث يشكل ثنائيات غير متجانسة مع بروتينات E ليرتبط بتسلسلات E-box في محفزات الجينات الخاصة بالعضلات. يُنشِّط الميوجينين التعبير عن البروتينات العضلية البنيوية، بما في ذلك سلسلة الميوسين الثقيلة، والتروبونين، وكرياتين كيناز، مما يدفع عملية الانتقال من الخلايا العضلية الأولية المتكاثرة إلى الأنابيب العضلية متعددة النوى. يُعد الميوجينين ضروريًا لتكوين ألياف عضلية سليمة، ويُعاد تنشيطه أثناء تجديد العضلات بعد الإصابة. يرتبط خلل تنظيم الميوجينين بأمراض ضمور العضلات، وضمور العضلات، وسرطان العضلات المخططة، حيث يعمل كعلامة تشخيصية وهدف علاجي محتمل لاستعادة وظيفة العضلات ومكافحة الأمراض المرتبطة بها.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total Myogenin اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي الميوجينين في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير القاعدي عن الميوجينين استجابةً لظروف الاستزراع

زُرعت خلايا RD وC2C12 في صفيحة ذات 96 بئراً بكثافات خلوية مختلفة (من 10000 إلى 80000 خلية/بئر) في وسط غذائي كامل، وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. ثم حُللت الخلايا باستخدام 25 إلى 200 ميكرولتر/بئر من محلول التحلل للحصول على نفس عدد الخلايا لكل نقطة بيانات.
تم تقييم مستويات الميوجينين وERK الكلي باستخدام اختبارات AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
تُعدّ الكثافة الخلوية العالية إشارةً لبدء تمايز العضلات. وكما هو متوقع، يزداد التعبير عن الميوجينين عند زراعة الخلايا بكثافة عالية. ولم تتغير مستويات ERK الكلية (البيانات غير معروضة).

زُرعت خلايا C2C12 في صفيحة ذات 96 بئراً (5000 خلية/بئر) في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تُركت الخلايا إما في وسط DMEM كامل (مصل عالي) أو في وسط DMEM + 2% مصل حصان (مصل منخفض) لمدة 24 ساعة.
بعد المعالجة، تم تحليل الخلايا باستخدام 25 ميكرولتر من محلول التحليل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة). تم تقييم مستويات الميوجينين وERK الكلي باستخدام اختبارات AlphaLISA SureFire Ultra الخاصة بكل منهما. في خطوة الكشف، تم نقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئراً، ثم أضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. تم قراءة الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يؤدي انخفاض مستوى المصل إلى تحفيز الخلايا على التمايز من الخلايا العضلية الأولية إلى الخلايا العضلية الأنبوبية. ويتم تنشيط التعبير عن الميوجينين في الخلايا العضلية الأولية عند بدء عملية التمايز. ولم تتغير مستويات ERK الكلية (البيانات غير معروضة).

التعبير عن الميوجينين في مختلف أنواع الخلايا
تم زرع الخلايا بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحليل.
تم تقييم مستويات الميوجينين باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (4000 خلية ملتصقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
وكما هو متوقع، تم التعبير عن الميوجينين فقط في خلايا RD و C2C12، وكلاهما مشتق من الأنسجة العضلية.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف: الميوجينين
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الأمراض النادرة
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل