مجموعة الكشف عن بروتين p16 INK4A البشري الكلي من شركة Revvity، طراز ALSU-TP16INK4-A-HV، AlphaLISA، تحتوي على 100 نقطة اختبار.

ملخص
يُعدّ مثبط كينازات السيكلين المعتمدة 2A (p16 INK4A) بروتينًا كابحًا للأورام، حيث يُثبّط كينازات السيكلين المعتمدة 4 و6 (CDK4/6)، وبالتالي يُنظّم دورة الخلية عن طريق منع فسفرة بروتين الورم الشبكي (Rb). يُوقف هذا التأثير تقدّم دورة الخلية من المرحلة G1 إلى المرحلة S، مما يُثبّط تكاثر الخلايا. ترتبط الطفرات أو الحذف في جين p16 INK4A بالعديد من أنواع السرطان، بما في ذلك سرطان الجلد، وسرطان البنكرياس، وسرطانات الرأس والرقبة. كما لوحظ ارتفاع مستويات p16 INK4A في الأمراض التنكسية العصبية مثل مرض الزهايمر، حيث قد يُساهم في فقدان الوظائف العصبية والتدهور المعرفي.
مجموعة الكشف عن AlphaLISA SureFire Ultra Human Total p16 INK4A هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي p16 INK4A في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات Alpha SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير التفاضلي لبروتين p16 INK4A الكلي في مختلف سلالات الخلايا البشرية
تم تخفيف مستخلصات الخلايا البشرية باستخدام محلول التحلل. يوضح الرسم البياني العدد التقريبي للخلايا في كل نقطة بيانات. تم تقييم مستويات p16 INK4A الكلية باستخدام مجموعة اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، تم نقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف إليها 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يعتمد التعبير الكلي عن البروتين p16 INK4A على نوع الخلية. وكما هو متوقع، تم رصد مستوى عالٍ جدًا من التعبير في خلايا HEK293 وHeLa، مع مستوى تعبير أقل في خلايا Hep G2 وSH-SY5Y وBeWo.
التطبيق - تحديد كمية البروتين
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
النوع المضيف - الإنسان
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-ص16 INK4A
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - علم الأورام
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل