مجموعة الكشف عن بروتين PI3K p85 البشري الكلي من شركة Revvity، طراز ALSU-TPI3K-B10K، AlphaLISA، تحتوي على 10000 نقطة اختبار.

ملخص
الوحدة التنظيمية p85 لكيناز الفوسفاتيديل إينوزيتول 3 المفسفر (p-PI3 Kinase p85) هي وحدة تنظيمية لإنزيم PI3K، الذي يلعب دورًا حاسمًا في نمو الخلايا وبقائها واستقلابها. ترتبط الوحدة p85 بالوحدة التحفيزية p110، مما يُثبّتها في حالة تثبيط في الظروف الطبيعية. عند تنشيطها بواسطة عوامل النمو أو الهرمونات، تخضع p85 لتغيرات بنيوية تُزيل التثبيط عن p110، مُحفزةً مسارات الإشارات اللاحقة مثل AKT. تُلاحظ اضطرابات في إشارات PI3K بشكل متكرر في السرطانات، مما يجعلها هدفًا رئيسيًا للعلاجات المضادة للسرطان.
مجموعة الكشف عن AlphaLISA SureFire Ultra Human Total PI3K p85 هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي PI3K p85 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات Alpha SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير التفاضلي عن PI3K الكلي في مختلف سلالات الخلايا البشرية
تم زرع الخلايا بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحليل.
تم تقييم مستويات PI3K الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
تم الكشف عن التعبير الكلي لـ PI3K في جميع خطوط الخلايا البشرية الملتصقة التي تم اختبارها. وقد لوحظ مستوى عالٍ جدًا من التعبير في خلايا MCF7 وA431، مع مستوى عالٍ من التعبير في خلايا HeLa وHEK293 وSH-SY5Y، ومستوى منخفض من التعبير في خلايا SW 1573، مما يدل على تنوع اختبار PI3K الكلي.
التطبيق - تحديد كمية البروتين
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
النوع المضيف - الإنسان
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-PI3K ص85
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الالتهاب
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل