Product Description
ملخص
إنزيم بروتين كيناز سي ثيتا (PKCθ) هو كيناز سيرين/ثريونين مستقل عن الكالسيوم، يُنشط بواسطة ثنائي أسيل جليسرول، ويلعب دورًا محوريًا في تنشيط الخلايا التائية والاستجابات المناعية. يُستقطب PKCθ إلى المشبك المناعي عند ارتباطه بمستقبلات الخلايا التائية (TCR)، حيث يقوم بفسفرة ركائز أساسية، بما في ذلك CARMA1، مما يؤدي إلى تنشيط NF-κB وإنتاج IL-2. وهو ضروري لتكاثر الخلايا التائية وتمايزها ووظيفتها الفعالة، لا سيما في الخلايا التائية المساعدة CD4+ والخلايا التائية السامة CD8+. كما ينظم PKCθ بقاء الخلايا التائية وتكوين الذاكرة المناعية. ويساهم خلل تنظيم PKCθ في أمراض المناعة الذاتية، ورفض الأعضاء المزروعة، وأورام الخلايا التائية الخبيثة. ويجري تطوير مثبطات انتقائية لـ PKCθ كعوامل مثبطة للمناعة لعلاج اضطرابات المناعة الذاتية، وكعلاجات محتملة للسرطان لتعديل المناعة الخلوية التائية والتغلب على آليات التهرب المناعي.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Total PKCθ اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي PKCθ في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:
تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:
مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:
فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.
بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.
بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
انتقائية اختبار PKCθ الكلي
تم تقييم انتقائية اختبار PKCθ الكلي عن طريق فحص بروتين PKCθ المؤتلف.
تم تحضير تخفيفات من بروتين PKCθ المؤتلف (Abcam ab56641) في محلول التحلل، وتم تقييمها باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من البروتين إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-PKCθ
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: أورام المناعة الذاتية
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924