مجموعة الكشف عن RIPK1 الكلي للفئران من Revvity، ALSU-TRIPK1-B-HV، AlphaLISA، 100 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ بروتين كيناز سيرين/ثريونين 1 المتفاعل مع المستقبلات (RIPK1) منظمًا أساسيًا لموت الخلايا والالتهاب. يستطيع RIPK1 التوسط في بقاء الخلية، أو موتها المبرمج (الاستماتة)، أو النخر المبرمج (النخر الخلوي) تبعًا للسياق الخلوي والتعديلات اللاحقة للترجمة. في شكله النشط، يُعزز RIPK1 النخر المبرمج من خلال التفاعل مع RIPK3 وMLKL. ويرتبط خلل تنظيم نشاط RIPK1 بأمراض التهابية وعصبية تنكسية، بالإضافة إلى السرطان.
مجموعة الكشف عن RIPK1 الكلي للفئران AlphaLISA SureFire Ultra Mouse هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن RIPK1 الكلي في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات Alpha SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التحقق من صحة اختبار RIPK1 الكلي في الفئران في خطوط خلوية مختلفة
تم تخفيف مستخلصات الخلايا البشرية والفأرية باستخدام محلول التحلل.
تم تقييم المستويات الكلية لبروتين RIPK1 باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 4000 خلية لخطوط الخلايا البشرية و8000 خلية لخطوط خلايا الفئران) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
كما هو متوقع، فإن اختبار Mouse RIPK1 Total AlphaLISA SureFire Ultra يتعرف على مستويات RIPK1 Total في خطوط خلايا الفئران فقط، ولم يتم الكشف عن أي إشارة في خطوط الخلايا البشرية.
التطبيق - تحديد كمية البروتين
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
النوع المضيف - الفأر
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-RIPK1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
النوع المستهدف - الفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الالتهاب
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل