Revvity، ALSU-TSTNG-B500، مجموعة الكشف عن STING الكلية للفئران AlphaLISA، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ مُحفّز جينات الإنترفيرون (STING) بروتينًا مُكيّفًا يُساهم في الاستجابات المناعية الفطرية للحمض النووي السيتوبلازمي. عند ارتباطه بالنيوكليوتيدات الحلقية الثنائية (CDNs) التي يُنتجها إنزيم cGAS استجابةً لاستشعار الحمض النووي، يخضع STING لتغيرات بنيوية وينتقل من الشبكة الإندوبلازمية إلى جهاز جولجي، مُحفزًا بذلك إنتاج الإنترفيرونات من النوع الأول والسيتوكينات الالتهابية، وذلك عبر مساري TBK1 وIRF3. يلعب STING أدوارًا حاسمة في الدفاع المضاد للفيروسات، والمراقبة المناعية للسرطان، وفي نشأة أمراض المناعة الذاتية. تُجرى حاليًا دراسات على مُنشّطات STING لاستخدامها في العلاج المناعي للسرطان، بهدف تعزيز المناعة المضادة للأورام، بينما يجري استكشاف مُثبّطاته لعلاج أمراض المناعة الذاتية والالتهابية الناتجة عن فرط إشارات الإنترفيرون من النوع الأول.
يُعد اختبار AlphaLISA SureFire Ultra Mouse Total STING اختبارًا مناعيًا ساندويتشيًا للكشف الكمي عن إجمالي STING في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra
يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التعبير عن STING في سلالات مختلفة من خلايا الفئران
تم زرع خطوط الخلايا الملتصقة في صفيحة ذات 96 بئراً (60000 خلية/بئر) وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، و5% ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 50 ميكرولتر من محلول التحلل B لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم زرع خط الخلايا المعلقة (خلايا EL-4) في صفيحة 96 بئراً (200000 خلية / بئر) في HBSS + 0.1٪ BSA ثم تم تحليلها باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحلل B لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم تقييم مستويات STING الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية (حوالي 12000 خلية ملتصقة أو 20000 خلية معلقة) إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-ستينغ
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
النوع المستهدف - الفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: الالتهابات، الأورام، علم الفيروسات
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل