مجموعة الكشف عن بروتين TRAF3 الكلي البشري والفأري من Revvity، ALSU-TTRAF3-A-HV، AlphaLISA، 100 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ العامل المرتبط بمستقبل عامل نخر الورم 3 (TRAF3) بروتينًا مُكيِّفًا يُشارك في تنظيم الاستجابات المناعية والاستماتة الخلوية. ويُمثّل TRAF3 وسيطًا رئيسيًا في مسارات الإشارات لمستقبلات مُتعددة، بما في ذلك مستقبلات عامل نخر الورم، ومستقبلات تول، ومستقبلات الخلايا البائية. يُنشّط TRAF3 مُركّب IKK، مما يؤدي إلى تنشيط NF-κB، الذي ينتقل بدوره إلى النواة لتعزيز التعبير عن الجينات المُستهدفة. يلعب TRAF3 دورًا هامًا في تنظيم كلٍّ من المناعة الفطرية والمناعة المكتسبة. يُمكن أن يُؤدي خلل تنظيم TRAF3 إلى أمراض المناعة الذاتية وحالات الالتهاب المُزمنة. كما يُمكن أن تُساهم الطفرات أو الحذف في جين TRAF3 في تطور أنواع مُختلفة من السرطانات، بما في ذلك الأورام اللمفاوية والورم النخاعي المُتعدد.
مجموعة الكشف عن إجمالي TRAF3 البشرية والفأرية AlphaLISA SureFire Ultra هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي TRAF3 في المستخلصات الخلوية، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات Alpha SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra

يقيس اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.

يستخدم اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بالستربتافيدين لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، وهو مُرتبط بالبيوتين. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra ثنائي الألواح

يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة OptiPlate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة

يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra.
تنوع التحليل
التحقق من صحة اختبار TRAF3 الكلي في مختلف خطوط الخلايا البشرية والفأرية
تم زرع الخلايا الملتصقة بمعدل 40000 خلية/بئر في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في وسط كامل وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول التحليل.
تم زرع الخلايا المعلقة بمعدل 100000 خلية/بئر (200 ميكرولتر/بئر) في صفيحة زراعة مكونة من 96 بئراً في محلول HBSS + 0.1% BSA وتم تحليلها باستخدام 50 ميكرولتر من محلول التحلل 5X.
تم تقييم مستويات TRAF3 الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Ultra. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من مستخلص الخلية إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
يعتمد التعبير الكلي عن بروتين TRAF3 على نوع الخلية. وكما هو متوقع، لوحظت مستويات عالية من بروتين TRAF3 الكلي في خلايا HeLa وA431 وTHP-1، بينما لم يُرصد أي تعبير في خلايا RAMOS أو RPMI 8226. التطبيق: قياس كمية البروتين
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
الكائن المضيف: الإنسان والفأر
التعديل الجزيئي - الإجمالي
مجموعة المنتجات - طقم
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-TRAF3
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الالتهاب
حجم الوحدة - 100 نقطة تحليل