مجموعة الكشف عن الفوسفور AKT1/2/3 (Ser473) البشري والفأري الخالية من البيوتين من Revvity، ASBF-PAKT-A10K، AlphaLISA، 10000 نقطة اختبار

ملخص
إنزيم AKT، المعروف أيضًا باسم بروتين كيناز B (PKB)، هو كيناز سيرين-ثريونين يُنظم عمليات خلوية حيوية، بما في ذلك البقاء على قيد الحياة والاستماتة الخلوية. يوجد منه ثلاثة نظائر - AKT1 وAKT2 وAKT3 - مُشفّرة بواسطة جينات مختلفة (PKBα وPKBβ وPKBγ). يتم تنشيط AKT من خلال الفسفرة عند الثريونين 308 بواسطة PDK1 وعند السيرين 473 بواسطة mTORC2، وذلك بعد ارتباط نطاقه PH بالفوسفاتيديل إينوزيتول. يرتبط خلل تنظيم نظائر AKT بأمراض متنوعة: غالبًا ما يتضخم AKT1 في سرطانات الثدي والمعدة، وAKT2 في سرطان البنكرياس وداء السكري من النوع الثاني نظرًا لدوره في امتصاص الجلوكوز، وAKT3 في سرطان الجلد وأورام الثدي العدوانية.
مجموعة الكشف عن الفوسفور AKT1/2/3 (Ser473) البشري والفأري الخالية من البيوتين هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن الفوسفور AKT1/2/3 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية ألفا.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
عينات غنية بالبيوتين

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين من أجل:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ فحص Phospho-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين
يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Biotin Free هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.
يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بعامل CaptSure 3 الخاص لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، والموسوم بعلامة CaptSure 3. في وجود البروتين المفسفر، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين المفرد الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المفسفر الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة Optiplate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين في لوحة واحدة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire العالية.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: AlphaLISA SureFire خالية من البيوتين
طريقة الكشف - ألفا
مجموعة المنتجات - طقم
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-AKT1/2/3
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الأورام الأيضية
حجم الوحدة - 10000 نقطة تحليل