Revvity، ASBF-PCYCE1-A50K، AlphaLISA، مجموعة الكشف عن الفوسفوسايكلين E1 البشري الخالي من البيوتين (Thr77)، 50000 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ السيكلين E1 بروتينًا تنظيميًا يتحكم في انتقال دورة الخلية من طور G1 إلى طور S عن طريق تنشيط كيناز السيكلين المعتمد 2 (CDK2). يقوم مُركّب السيكلين E1-CDK2 بفسفرة ركائز، بما في ذلك بروتين الورم الأرومي الشبكي وp27Kip1، مما يُعزز بدء تضاعف الحمض النووي. يحدث فرط التعبير عن السيكلين E1 أو تضخيمه في العديد من أنواع السرطان، بما في ذلك سرطان الثدي والمبيض وبطانة الرحم، مما يُؤدي إلى تكاثر غير مُنضبط وعدم استقرار كروموسومي. تُظهر الأشكال ذات الوزن الجزيئي المنخفض من السيكلين E1 نشاطًا ورميًا مُعززًا ومقاومة لمثبطات CDK. يجري تطوير مثبطات CDK2 الانتقائية كعلاجات لأنواع السرطان التي يُظهر فيها السيكلين E1 تضخيمًا.
مجموعة الكشف عن الفوسفو-سيكلين E1 البشري الخالي من البيوتين AlphaLISA SureFire هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن الفوسفو-سيكلين E1 (Thr77) في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية ألفا.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر في تنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
عينات غنية بالبيوتين

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين من أجل:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ فحص فوسفو-ألفا ليسا شورفاير الخالي من البيوتين
يقيس اختبار Phospho-AlphaLISA SureFire Biotin Free هدف البروتين عند فسفرته في بقايا محددة.
يستخدم هذا الفحص نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقع الفسفرة وموقع آخر بعيد على البروتين المستهدف. تتطلب فحوصات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالفحص، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بعامل CaptSure 3 الخاص لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، والموسوم بعلامة CaptSure 3. في وجود البروتين المفسفر، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين المفرد الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين المفسفر الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة Optiplate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Phospho-AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Phospho-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين في لوحة واحدة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف المفسفر باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire العالية.
حساسية الفحص
حساسية الفحص - تخفيف مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص الخلايا من خلايا BeWo التي تمت زراعتها حتى وصلت إلى مرحلة التكاثر الكامل في قارورة T175 وتم تحليلها في 3 مل من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج.
تم تخفيف المستخلص الخلوي بشكل متسلسل في محلول التحلل، وقُيِّمت مستويات الفسفرة (Thr77) لبروتين سيكلين E1 والمستويات الكلية باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من المستخلص الخلوي إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا لكل نقطة بيانات. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يمكن لهذا التحليل الكشف عن بروتين سيكلين E1 المُفسفر (Thr77) حتى 200 خلية/نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-سيكلين E1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - علم الأورام
حجم الوحدة: 50,000 نقطة تحليل