Revvity، ASBF-TIRF5-A500، مجموعة AlphaLISA للكشف عن إجمالي IRF5 البشري والفأري الخالية من البيوتين، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ عامل تنظيم الإنترفيرون 5 (IRF5) عامل نسخ يُشارك في المناعة الفطرية والاستجابات الالتهابية، حيث يُنظّم التعبير عن الإنترفيرونات من النوع الأول (IFN-α وIFN-β) والسيتوكينات المُحفّزة للالتهاب. يتم تنشيط IRF5 بواسطة مستقبلات التعرّف على الأنماط، مثل مستقبلات تول (TLR) أو MDA5 أو STING، استجابةً للعدوى الفيروسية، ويلعب دورًا حاسمًا في الدفاع المضاد للفيروسات. في حالته غير النشطة، يتواجد IRF5 في سيتوبلازم الخلايا غير المصابة. وعند تنشيطه، يخضع لعملية فسفرة، وتكوين ثنائيات، وانتقال نووي لتحفيز التعبير الجيني. يرتبط خلل تنظيم IRF5 بأمراض المناعة الذاتية، مثل الذئبة والتهاب المفاصل الروماتويدي، بالإضافة إلى السرطانات الالتهابية، حيث يُعدّل وظائف البلاعم المرتبطة بالورم.
مجموعة الكشف عن إجمالي IRF5 البشري والفأري الخالية من البيوتين AlphaLISA SureFire هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي IRF5 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية Alpha.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire Ultra للأغراض التالية:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Total-AlphaLISA SureFire Ultra الخالي من البيوتين
يقيس اختبار Total-AlphaLISA Surefire Ultra Biotin Free مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA Surefire Ultra نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بعامل CaptSure 3 الخاص لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، والموسوم بعلامة CaptSure 3. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra Biotin Free ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة Optiplate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire Ultra الخالية من البيوتين. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire Ultra أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire Ultra الخالية من البيوتين في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra العالية.
تنوع التحليل
التعبير عن IRF5 في مختلف أنواع الخلايا
تم زرع خطوط الخلايا الملتصقة في صفيحة ذات 96 بئراً (40000 خلية/بئر) وحُضنت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، و5% ثاني أكسيد الكربون. تم تحليل الخلايا باستخدام 200 ميكرولتر من محلول التحليل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم زرع خطوط الخلايا المعلقة في صفيحة ذات 96 بئراً (400000 خلية / بئر) وتم تحليلها باستخدام 200 ميكرولتر من محلول التحلل لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج (350 دورة في الدقيقة).
تم تقييم مستويات IRF5 باستخدام اختبار AlphaLISA SureFire Biotin Free. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر (ما يقارب 2000 خلية ملتصقة و20000 خلية معلقة) من مستخلص الخلية إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة على جهاز Envision باستخدام إعدادات AlphaLISA القياسية.
يختلف مستوى التعبير عن IRF5 بين سلالات الخلايا البشرية والفأرية. وقد تم رصد مستويات عالية من التعبير في خلايا THP-1 وRPMI 8226 وRAW 264.7.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: AlphaLISA SureFire خالية من البيوتين
طريقة الكشف - ألفا
مجموعة المنتجات - طقم
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-IRF5
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة: الإنسان والفأر
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - الالتهاب
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل