Revvity، ASBF-TST4-A500، مجموعة الكشف عن STAT4 البشري الكلي الخالية من البيوتين AlphaLISA، 500 نقطة اختبار

ملخص
يُعدّ مُحَوِّل الإشارة ومُنشِّط النسخ 4 (STAT4) عامل نسخ يُحفِّز الاستجابات الخلوية للإنترلوكين-12 والإنترفيرونات من النوع الأول، ويلعب دورًا أساسيًا في تمايز خلايا Th1 وتنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية. يتم تنشيط STAT4 عن طريق الفسفرة عند التيروزين 693، مما يؤدي إلى تكوين ثنائيات وانتقالها إلى النواة. يُحفِّز STAT4 المُنشَّط التعبير عن الإنترفيرون غاما (IFN-γ) وT-bet، مما يُعزِّز استجابات Th1 والمناعة الخلوية ضد مسببات الأمراض داخل الخلايا. يُساهم STAT4 في إمراضية أمراض المناعة الذاتية، حيث ترتبط المتغيرات الجينية بزيادة خطر الإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي والذئبة. يُمثِّل تعديل نشاط STAT4 فرصة علاجية لتعزيز المناعة أو كبح استجابات Th1 المرضية.
مجموعة الكشف عن إجمالي STAT4 البشري الخالية من البيوتين AlphaLISA SureFire هي عبارة عن فحص مناعي ساندويتش للكشف الكمي عن إجمالي STAT4 في مستخلصات الخلايا، باستخدام تقنية ألفا.
التنسيقات:

تحتوي مجموعة HV (عالية الحجم) على كواشف لتشغيل 100 بئر بتنسيق 96 بئر، باستخدام حجم تفاعل 60 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة الـ 500 نقطة على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 500 بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط العشرة آلاف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 10000 بئر بتنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.
تحتوي مجموعة النقاط الخمسين ألف على ما يكفي من الكواشف لتشغيل 50 ألف بئر في تنسيق 384 بئر، باستخدام حجم تفاعل 20 ميكرولتر.

تتوافق مجموعات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين مع:

مستخلصات الخلايا والأنسجة
مُعدِّلات الأجسام المضادة
الأجسام المضادة العلاجية البيولوجية
عينات غنية بالبيوتين

يمكن استخدام مجموعات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين من أجل:

فحوصات الكيناز الخلوي
دراسات تنشيط المستقبلات
الفحص عالي الإنتاجية للدراسات ما قبل السريرية
كيف يعمل؟
مبدأ فحص Total-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين
يقيس اختبار Total-AlphaLISA Surefire Biotin Free مستوى التعبير عن بروتين مستهدف في مستخلص خلوي.
يستخدم اختبار Total-AlphaLISA Surefire نوعين من الأجسام المضادة التي تتعرف على موقعين مختلفين على البروتين المستهدف. تتطلب اختبارات AlphaLISA نوعين من الخرز: خرز المستقبل وخرز المانح. يُغطى خرز المستقبل بعامل CaptSure™ الخاص لتثبيت الجسم المضاد الخاص بالاختبار، والموسوم بعلامة CaptSure. أما خرز المانح فيُغطى بعامل CaptSure 3 الخاص لالتقاط أحد الأجسام المضادة للكشف، والموسوم بعلامة CaptSure 3. في وجود البروتين المستهدف، يُقرّب الجسمان المضادان خرز المانح والمستقبل من بعضهما، حيث ينقل الأكسجين الأحادي الطاقة لإثارة خرز المستقبل، مما يسمح بتوليد إشارة ألفا مضيئة. تتناسب كمية الضوء المنبعث طرديًا مع كمية البروتين الموجودة في العينة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire الخالي من البيوتين ثنائي الألواح
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة Optiplate™ ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Total-AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين. يسمح هذا البروتوكول بمراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف متعددة.

بروتوكول فحص Total-AlphaLISA SureFire أحادي اللوحة
يمكن الكشف عن البروتين المستهدف الكلي باستخدام كواشف AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يتيح هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية (HTS) تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire العالية.
حساسية الفحص
حساسية الفحص - تخفيف مستخلص الخلية
تم تحضير مستخلص خلوي من خلايا NK-92 التي تم تجويعها من إنترلوكين-2 لمدة 18 ساعة، ثم تم تحفيزها بـ 200 نانوغرام/مل من إنترلوكين-12 لمدة 30 دقيقة في محلول HBSS مضاف إليه 0.1% من ألبومين المصل البقري. تم تحليل الخلايا عند تركيز 3.2 × 10⁶ خلية/مل بإضافة محلول تحليلي 5X لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع التحريك.
تم تخفيف المستخلص الخلوي بشكل متسلسل في محلول التحلل، وقُيِّمت مستويات STAT4 Phospho (Tyr693) والمستويات الكلية باستخدام فحوصات AlphaLISA SureFire الخالية من البيوتين. في خطوة الكشف، نُقل 10 ميكرولتر من المستخلص الخلوي إلى صفيحة OptiPlate بيضاء ذات 384 بئرًا، ثم أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المستقبل، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أُضيف 5 ميكرولتر من مزيج المانح إلى كل بئر، وحُضِّنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. قُرئت الصفيحة باستخدام جهاز Envision وفقًا لإعدادات AlphaLISA القياسية.
يُشار إلى العدد التقريبي للخلايا لكل نقطة بيانات. يُمثل الخط المنقط خلفية التحليل. يمكن لهذا التحليل الكشف عن تعبير STAT4 حتى 500 خلية لكل نقطة بيانات.
تطبيق - إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: ألفا ليسا شورفاير ألترا
طريقة الكشف - ألفا
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
حجم العينة - 10 ميكرولتر
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-STAT4
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي: أورام الالتهاب
حجم الوحدة - 500 نقطة تحليل