مجموعة الكشف عن بروتين SMAD1 البشري الفوسفوري المتعدد (Ser463/465 والإجمالي) من Revvity، MPSU-PTSM1-K50K، AlphaLISA، 50000 نقطة اختبار

ملخص
يُعد SMAD1 عامل نسخ ووسيطًا رئيسيًا في مسار إشارات بروتين تكوين العظام (BMP)، الذي ينتمي إلى عائلة عامل النمو المحول بيتا (TGF-β). ينظم SMAD1 الجينات المشاركة في نمو الخلايا وتمايزها وموتها المبرمج وتطور الجنين. عند تنشيط مستقبلات BMP، يُفسفر SMAD1 ويُشكل مُركبًا مع SMAD4، وينتقل إلى النواة لتحفيز التعبير الجيني. يُعد SMAD1 ضروريًا للتشكيل الجنيني المبكر، لا سيما في تكوين المحور الظهري البطني وتحفيز الأديم المتوسط، ويلعب دورًا حاسمًا في تمايز الخلايا العظمية وتكوين الغضروف، مما يجعله حيويًا لنمو الهيكل العظمي واستتبابه. يرتبط خلل تنظيم إشارات SMAD1 بالتليف واضطرابات الهيكل العظمي وأنواع من السرطان مثل الورم الأرومي الدبقي وسرطان الثدي.
تُستخدم مجموعة الكشف عن بروتين SMAD1 الفسفوري (Ser463/465) + بروتين SMAD1 الكلي، من نوع Multiplex SureFire Ultra، لقياس مستويات بروتين SMAD1 الداخلي، سواءً المُفسفر أو الكلي، في مستخلصات الخلايا، وذلك باستخدام اختبار AlphaLISA™ متعدد القنوات بدون غسل. لا تتطلب هذه المجموعة استخدام سلالات خلوية مُهندسة خصيصًا. تتوافق إشارة 615 نانومتر (Eu) مع تحليل بروتين SMAD1 المُفسفر، بينما تتوافق إشارة 545 نانومتر (Tb) مع تحليل بروتين SMAD1 الكلي. صُممت هذه المجموعة لتوفير نطاقات قياس فائقة الدقة (نسبة الإشارة إلى الخلفية)، ولضمان عملها دون تداخل في وجود الأجسام المضادة الخارجية، مما يجعلها مناسبة لدراسة الأجسام المضادة العلاجية والمثبطة.

خطوات بدون غسل، خطوات بدون فصل
اختبار التعدد
لا يوجد تداخل من الأجسام المضادة الخارجية
تظهر النتائج في أقل من 3 ساعات

في هذا الاختبار، تُغطى حبة ألفا 615 المُستقبِلة بجسم مضاد CaptSure™، الذي يرتبط بالجسم المضاد المُضاد للفوسفور والموسوم بـ CaptSure. وتُغطى حبة ألفا 545 المُستقبِلة بعامل CaptSure2™، الذي يرتبط بالجسم المضاد المُضاد لبروتين الهدف الكلي والموسوم بـ CaptSure2. أما حبة ألفا المانحة فترتبط بالجسم المضاد المُضاد لبروتين الهدف الكلي والموسوم بالبيوتين.
كيف يعمل؟
مبدأ اختبار Multiplex SureFire Ultra
يقيس اختبار Multiplex SureFire Ultra البروتين الفوسفوري والبروتين الكلي في آنٍ واحد عند مستوى محدد. ويستخدم ثلاثة أجسام مضادة تتعرف على موقع الفسفرة وموقعين بعيدين على البروتين المستهدف. ويتطلب الاختبار ثلاثة أنواع من الخرز: نوعان مختلفان من خرز الاستقبال وخرزة مانحة واحدة.

يتم تغليف حبة Alpha 615 Acceptor بالأجسام المضادة CaptSure™، والتي ترتبط بالأجسام المضادة المستهدفة المضادة للفوسفور الموسومة بـ CaptSure.
يتم تغليف حبة Alpha 545 Acceptor بالأجسام المضادة CaptSure2، والتي ترتبط بالأجسام المضادة المضادة للبروتين المستهدف الكلي الموسومة بـ CaptSure2.
ترتبط حبة ألفا المانحة بالأجسام المضادة للبروتين المستهدف الكلي المبيوتن.

عند وجود البروتين المُفسفر، تعمل الأجسام المضادة الثلاثة على تقريب حبيبات المانح والمستقبل من بعضها، مما يسمح للأكسجين الأحادي بنقل الطاقة وإثارة كلتا الحبيبتين المستقبلتين. ينتج عن ذلك إشارة ألفا مضيئة عند 615 نانومتر و545 نانومتر. تتناسب إشارة 615 نانومتر (Eu) طرديًا مع كمية البروتين المُفسفر، بينما تتوافق إشارة 545 نانومتر (Tb) مع مستويات البروتين الكلية.

بروتوكول فحص ثنائي الألواح متعدد التحليلات SureFire Ultra
يتضمن بروتوكول الصفيحتين زراعة الخلايا ومعالجتها في صفيحة ذات 96 بئراً قبل تحللها، ثم نقل المستخلصات إلى صفيحة Optiplate ذات 384 بئراً قبل إضافة كواشف الكشف Multiplex SureFire Ultra. يُمكّن هذا البروتوكول من مراقبة حيوية الخلايا وكثافتها. إضافةً إلى ذلك، يمكن استخدام المستخلصات من بئر واحد لقياس أهداف مختلفة.

بروتوكول فحص لوحة واحدة متعدد الاستخدامات SureFire Ultra
يمكن الكشف عن البروتينات المستهدفة المفسفرة/الإجمالية باستخدام كواشف Multiplex SureFire Ultra في صفيحة واحدة تُستخدم للزراعة والمعالجة والتحليل. لا حاجة لخطوات غسل. يُمكّن هذا البروتوكول المصمم بتقنية الفحص عالي الإنتاجية من تصغير حجم العينة مع الحفاظ على جودة AlphaLISA SureFire Ultra العالية. التطبيق: إشارات الخلية
متوافق مع أنظمة التشغيل الآلي - نعم
العلامة التجارية: AlphaLISA SureFire Ultra Multiplex
طريقة الكشف - ألفا
مجموعة المنتجات - طقم
مدة البروتوكول: ساعتان في درجة حرارة الغرفة
شروط الشحن - يتم الشحن في ثلج أزرق
الهدف-SMAD1
البروتينات الفوسفورية من الفئة المستهدفة
الأنواع المستهدفة - الإنسان
تكنولوجيا ألفا
المجال العلاجي - علم الأورام
حجم الوحدة - 50000 نقطة تحليل